牙龈卟啉单胞菌PG0839基因突变株的构建(1)
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[摘要] 目的 构建牙龈卟啉单胞菌毒力岛基因PG0839突变菌株，为研究PG0839基因功能提供实验基础。方法 扩增1 584 bp PG0839基因片段，对聚合酶链反应(PCR)产物和pUC19载体进行BamH Ⅰ和EcoRⅠ双酶切，连接酶
切产物得到质粒pPG0839-1。将2 101 bp erm基因产物插入到pPG0839-1中PG0839基因的EcoRⅤ位点，构建质粒pPG0839-2，作为电穿孔的供体质粒。电穿孔转化于受体菌牙龈卟啉单胞菌W83菌株，红霉素抗性培养基筛选阳性克隆，命名为PG0839基因突变菌株。结果 运用插入失活方法构建PG0839基因突变菌株，进而通过酶切、测序、PCR和反转录PCR对PG0839基因突变菌株进行验证，证实PG0839基因突变菌株构建成功。结论 本实验成功构建PG0839基因突变菌株。
[关键词] 牙龈卟啉单胞菌； 毒力岛； 基因打靶
[中图分类号] R 781.5 [文献标志码] A [doi] 10.3969/j.issn.1000-1182.2012.02.020
Construction PG0839 gene-defective mutant of Porphyromonas gingivalis Liu Jingbo1, Pan Yaping1, Li Chen1, Lin Li1, Zhong Ming2 ......
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