牙本质基质蛋白—1仿生多肽的设计与评价(2)
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参见附件。
1.3 DMP-1仿生多肽诱导HA晶体成核的能力
在透射电子显微镜(transmission electron micro-scopy，TEM)载物用镀膜铜网上滴加5 g·L-1的多肽溶
液40 μL后，再滴加2.5%戊二醛约10 μL以固定多肽，将滴加了多肽的铜网分别在10 mmol·L-1氯化钙溶液和5 mmol·L-1磷酸氢二钠溶液中各浸泡1 h(37 ℃)，作
为1个循环，共进行5个循环完成交替矿化实验，以没有多肽涂层的铜网作为阴性对照；交替矿化后用蒸馏水漂洗，待铜网自然干燥，用SEM(FE-SEM，Sirion 200型，FEI公司，美国)和TEM(TEMH-300型，Hitachi Limited公司，日本)观察沉积物的形态，以选区电子衍射环(selected area diffraction，SAD)确定晶体结构，分析DMP-1仿生多肽从溶液中摄取钙和磷酸根离子，及诱导HA晶体成核生长的能力。
2 结果
2.1 DMP-1仿生多肽与牙本质胶原纤维网的特异性
结合能力测定
SEM观察显示：牙本质片经HCl溶液处理后完全脱矿成为胶原纤维网(图1)，未见HA晶体存在。经
XRD检查可进一步确定，脱矿的牙本质基质中无HA峰存在，仅在20°左右有胶原纤维宽峰(图2)。由此
可见，本实验设计的方法可实现牙本质完全脱矿。
A：× 2 000；B：× 80 000。
免疫荧光实验中，采用荧光蛋白标记的多肽分子，以荧光标记的免疫球蛋白抗体作为阴性对照 ......
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