舌鳞状细胞癌细胞与正常黏膜细胞微泡的差异蛋白组学研究(3)
 |
| 第1页 |
参见附件。
2 结果
2.1 EXO的形态学观察
经SEM和TEM观察，均可见培养细胞分泌出大量的EXO；EXO呈现为圆形或类圆形的小体结构，大小不等，直径为40~100 nm(图1)。
2.2 EXO分子标志物的鉴定
以细胞全蛋白为阳性对照，以β-actin为内参，通过Western blot试验，EXO在相对分子质量为7.3×104处检测到HSP-70蛋白的表达，在4.0×104处有MHC-Ⅰ蛋白的表达。
左：SEM× 5 000；右：TEM× 80 000。
图1Tca8113细胞表面外泌的EXO(左)及EXO的形态(右)
Fig1EXO observed under SEM in Tca8113 cells surface (left) and
EXO morphology observed under TEM (right)
2.3 差异蛋白组学实验
2.3.1 EXO的定量分析 通过Bradford法测定每次分离制备的EXO悬液中的总蛋白含量，平均每毫升EXO悬液可获得EXO(30.2±1.9)μg，质量范围为28.3~
32.1 μg，95%可信区间为27.5~33.4 μg。
2.3.2 双向聚丙烯酰胺凝胶电泳 通过第一向IEF聚焦和第二向SDS-PAGE电泳得到的分离电泳图谱见图2。将得到的凝胶图谱进行考马斯亮蓝染色，通过Image Master V 5.0软件进行扫描和自动分析，设定差异表达量在2倍及以上的点纳入下一步实验。本实验共筛选纳入16个差异点进行质谱学分析和鉴定，其中舌鳞状细胞癌细胞EXO上调表达的有12个点，下调表达的有4个点。
图2对照组(HOK细胞，上)和实验组(Tca8113细胞 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件。