RGD肽修饰壳聚糖作为种植体表面基因载体的研究(2)
 |
| 第1页 |
参见附件。
1.4 RGD-CS包装pDNA
1.4.1 复凝聚法制备RGD-CS/pDNA复合体 称取RGD-CS 10.0 mg，溶于0.2 mol·L-1 HAc-NaAc缓冲液(pH 5.0)10 mL中，配制成质量浓度为1 mg·mL-1的RGD-CS溶液。将pDNA配制成0.1 mg·mL-1的溶液。在每一部分实验中，保持每个样品中加入的DNA的质量一定，按照不同的N/P(阳离子载体中的氮原子与DNA的磷原子的摩尔比例)加入一定量的RGD-CS溶液，N/P为0、1、2、5、10、20、50。采用0.2 mol·L-1 HAc-NaAc缓冲液(pH 5.0)将复合体溶液定容至相同体积。分别取RGD-CS溶液与骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein，BMP)2质粒溶液在55 ℃水浴预热10 min，迅速将二者混合，通过涡旋仪混匀1 min，将混合物在室温下放置30 min，即得RGD-CS/pDNA复合体。反应如图1。以不经RGD修饰的CS作为对照，在同样条件下，合成CS/pDNA复合体。
1.4.2 凝胶电泳阻滞试验检测RGD-CS对质粒的包裹情况 选取不同N/P比制备样品，取16 μL RGD-CS/BMP2复合体与4 μL Loading Buffer混合，在120 mV电压下电泳30 min。紫外灯下观察RGD-CS对质粒的包裹情况。
1.4.3 AFM观察RGD-CS/pDNA复合体 取RGD-CS/pDNA复合体固定于云母片上，在轻敲模式下用AFM观察其形态，轻敲频率37 kHz，扫描速度1 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件。