腭裂相关基因甲状腺转录因子—2转基因小鼠的生物学特征(2)
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参见附件。
1.2.5 转基因小鼠腭突组织TTF-2蛋白表达的免疫组织化学检测 取TTF-2转基因小鼠(胚胎12～15 d)腭突，用4%甲醛缓冲液(pH=7.0)固定24 h后，石蜡包埋，5 μm厚连续切片，行免疫组织化学染色，DAB显色。光镜下观察腭突中TTF-2的表达状况。
2 结果
2.1 TTF-2转基因表达载体的构建
2.1.1 TTF-2基因的扩增结果 经PCR扩增获得TTF-2基因片段，其大小与理论值1 113 bp相符(图1a)。
2.1.2 扩增片段的克隆与鉴定 克隆载体pMD18-T-TTF-2经转化、扩增后，进行琼脂糖凝胶电泳，其鉴定结果见图1b。
2.1.3 重组表达质粒的酶切鉴定 将重组表达质粒pBROAD3-TTF-2扩增后行KpnⅠ和Hind Ⅲ酶切鉴定，其电泳结果见图1c。
2.2 转基因小鼠的制备
注射原核期受精卵982枚，发育为2-细胞胚胎580枚(图2)，均移植入48个假孕受体昆明白小鼠，得到胎鼠68只。有2只新生鼠出现腭裂(图3)，生后24 h死亡。小鼠胚胎腭突发育的组织学切片见图4，观察胚胎12～15 d(E12～E15)的腭突形态，转基因组只是在胚胎15 d(E15)时腭突没有融合而形成腭裂，其余时间对照组与转基因组无明显差别。
2.3 转基因鼠基因组DNA的PCR鉴定结果
68只胎鼠(包括2只腭裂新生鼠)经PCR检测 ......
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