人骨形态发生蛋白2真核表达载体构建及其基因/人骨形态发生蛋白2真核表达载体构建及其基因/(1)
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[摘要] 目的 构建人骨形态发生蛋白(BMP)2的真核表达型载体，并利用其与壳聚糖制备纳米复合体。方法 体外利用双酶切法将pMD18T-hBMP2-His质粒与pIRES2-EGFP真核表达载体连接，构建pIRES2-EGFP-hBMP2-His真核表达载体；采用5种不同相对分子质量及脱乙酰度的壳聚糖，通过去溶剂法在不同N/P比(壳聚糖中的胺基含量与质粒中磷酸基含量的摩尔比)情况下制备壳聚糖/pIRES2-EGFP-hBMP2-His纳米复合体。ZetaPALS电位及粒度分析仪检测纳米复合体的粒径大小、分布及Zeta电位，琼脂糖凝胶电泳分析及荧光分光法评定壳聚糖对pIRES2-EGFP-hBMP2-His纳米复合体的包裹情况，原子力显微镜观察粒径形貌。结果 1)成功构建pIRES2-EGFP-hBMP2-His真核表达载体，并经酶切、测序证实；2)成功制备壳聚糖/pIRES2-EGFP-hBMP2-His纳米复合体，壳聚糖对pIRES2-EGFP-hBMP2-His质粒具有包裹作用；3)制备的壳聚糖/pIRES2-EGFP-hBMP2-His复合体呈球状，粒径为111.7～3 214 ......
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