近红外量子点连接的精氨酸—甘氨酸—天冬氨酸肽段荧光探针对口腔鳞状细胞癌的活体可视化成像(3)
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参见附件。
1.2.3 肿瘤活体可视化成像观察 按1.2.2描述的方法建立OSCC裸鼠模型，共9只，每日观察肿瘤生长情况，待9只裸鼠全部成瘤，3周时肿瘤直径达0.8～
1.2 cm时开始实验。实验分为3组，每组3只。实验前用2%戊巴比妥(40 mg·kg-1)行腹腔注射麻醉。实验组：通过尾静脉注射100 ?L含150 pmol QD800的QD800-RGD。对照组Ⅰ：通过尾静脉注射100 ?L QD800(含量为150 pmol)。对照组Ⅱ：通过尾静脉先注射250 ?L质量浓度为2 g·L-1的RGD，2 h后再尾静脉注射100 ?L含150 pmol QD800的QD800-RGD。静脉注射QD800-RGD或QD800后0.5、1、3、6、9、12 h后分别用活体成像系统Maestro EX IVIS(激发光、发射光波长分别为655、800 nm)进行活体成像检测。曝光时间50 ms，采集时间30 s，像素1 024×
1 024。图像采集后用Maestro EX IVIS提供的Maestro 2.10.0软件进行图像处理和数据分析，分别显示自发荧光和目标荧光信号，然后测量其荧光值，计算荧光信噪比值(肿瘤荧光强度与背景自发荧光强度之比)。将每种信号添加伪色彩，本研究将自发荧光设置为绿色，目标荧光信号设置为红色，最后将两种色彩叠加。
1.2.4 体内免疫荧光检测QD800-RGD与整合素αvβ3的连接 实验组和对照组裸鼠分别在12 h活体成像完毕后断颈处死，立即解剖取出肿瘤，切分为2块，其中一块行常规石蜡包埋，另一块用冰冻切片包埋剂包埋并速冻，在-20 ℃下切割为7 μm厚的组织切片，然后用大鼠抗小鼠CD105单克隆抗体在室温下孵育30 min，PBS冲洗3次后滴加兔抗大鼠FITC荧光二抗(1∶100)，室温下孵育30 min，PBS冲洗3次，然后使用DAPI染细胞核5 min ......
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