李昊 周海伦 王琪 李伟

    1.广西医科大学附属口腔医院口腔修复科，南宁 530021；2.口腔疾病研究国家重点实验室 华西口腔医院(四川大学)，成都 610041

    近年来，糖尿病在人群中的发病率逐年升高。糖尿病患者长期高血糖状态可引起身体多种组织、器官发生病变，糖尿病性骨疾病就是重要的并发症之一。糖尿病患者易罹患骨质疏松、骨缺损愈合障碍等骨性疾病，导致牙槽骨快速吸收、拔牙创愈合迟缓等不良后果，严重影响多种口腔疾病治疗的实施，其发病机制复杂，且常规治疗往往效果不佳，如何治疗糖尿病性骨疾病已成为临床工作的难点之一。

    随着研究不断深入，越来越多的资料显示，糖尿病状态下细胞成骨功能障碍是此类疾病发生的重要原因。作为新兴细胞生物学研究中的重要细胞，骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)在牙槽骨等骨形成过程中的作用倍受瞩目。连接蛋白Lnk是新发现的在干细胞信号转导中有重要桥梁作用的蛋白，在多种病理状态下高表达[1-2]，其下游的干细胞因子(stem cell factor，SCF)-干细胞因子受体(cKit)通路在多种干细胞迁移、分化等过程中起关键作用[3]。既往研究[4]表明，抑制Lnk的表达，调节Lnk/SCF-cKit信号通路可在骨折愈合过程中促进成骨。本研究拟用靶向Lnk的RNA干扰技术调节糖尿病状态BMSCs的Lnk/SCF-cKit通路，并检测BMSCs成骨功能的变化，探讨改善糖尿病状态BMSCs成骨功能的方法，为探寻糖尿病性骨疾病的治疗措施提供新思路。

    1 材料和方法

    1.1 主要试剂和仪器

    靶向干扰Lnk基因的shRNA(Dharmacon公司，美国)，正义链5'-CGAGUUACCUCUUUCCUUA-3'。链脲佐菌(Sigma公司，美国)，小鼠抗大鼠单克隆抗体Lnk、SCF、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)、骨钙素(osteocalcin，OCN)、Ⅰ型胶原蛋白a1(collagen typeⅠ a1，ColⅠa1)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)(Santa Cruz公司，美国)，兔抗大鼠多克隆抗体cKit(Abcam公司，美国)，小鼠抗大鼠单克隆抗体CD11b、CD44、CD45、CD90、羊抗小鼠IgG抗体、羊抗兔IgG抗体、SP染色试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)，Nikon 80i型显微镜(Nikon公司 ......