王飞 张慧宇 窦予昕 李适廷 张纲 谭颖徽第三军医大学新桥医院口腔科，重庆 400037

    降钙素基因相关肽通过Hippo通路调控小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的实验研究

    王飞张慧宇窦予昕李适廷张纲谭颖徽

    第三军医大学新桥医院口腔科，重庆 400037

    [摘要]目的前期研究发现降钙素基因相关肽(CGRP)能够促进成骨细胞的生物学活性，为了进一步揭示CGRP在骨修复中的作用，检测CGRP对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响，并对Hippo通路在这个过程中的作用进行了初步探讨。方法在体外诱导培养的BMSCs中加入不同浓度的CGRP，处理48 h后测试碱性磷酸酶(ALP)活性，以筛选的优势浓度；处理7 d后进行茜素红染色，分别检测细胞的分化情况。应用Western blot检测CGRP作用于BMSCs后，Hippo通路核心分子Mst1/2蛋白磷酸化的表达水平；利用Hippo通路抑制剂维替泊芬(Verteporfin)阻断下游Yap信号，逆转录聚合酶链反应检测其对成骨相关因子Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、Runt相关转录因子2(Runx2)mRNA的表达影响。结果ALP活性检测结果显示，与空白对照组相比，10-9、10-8、10-7mol·L-1浓度范围的CGRP都能显著促进小鼠ALP活性的增加(P<0.05)，以10-8mol·L-1浓度的CGRP为最佳刺激浓度。用10-8mol·L-1浓度的CGRP处理后，茜素红染色显示钙化结节明显增多。CGRP能够显著上调p-Mst1/2蛋白的表达(P<0.05)；当运用了抑制剂Verteporfin时，显著降低了CGRP诱导的Runx2、ColⅠ mRNA的表达(P<0.05)。结论CGRP能够促进小鼠BMSCs的成骨分化，且Hippo信号通路介导了CGRP作用于小鼠BMSCs成骨分化的过程。

    [关键词]降钙素基因相关肽；骨髓间充质干细胞；Hippo信号通路

    Supported by: The National Natural Science Foundation of China(81371110, 81300873).Correspondence: Tan Yinghui, E-mail: tanyhxqkq@163.com.

    降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide，CGRP)在骨发育、骨代谢、骨修复以及种植体周围的骨重建中都具有重要的病理生理学意义。本课题组在前期的实验中发现，CGRP能显著促进体外培养的人MG-63成骨细胞样细胞和鼠成骨细胞的增殖和分化 ......