伍宝琴 黎春晖 张梦莲 聂敏海

    1.西南医科大学口腔医学院口颌面修复重建和再生实验室，泸州646000；2.西南医科大学附属口腔医院牙周黏膜病科，泸州646000

    口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcino‐ma，简称口腔鳞癌)是严重危害人类健康的恶性肿瘤之一，易复发、转移，预后差[1]，探索安全高效的口腔鳞癌治疗方案具有重要的科学意义及临床转化价值。外泌体介导的基因及药物运送为肿瘤治疗提供了新的思路。外泌体是由细胞膜两次内陷形成的具有双层膜结构的囊泡状小体，直径30～150 nm[2]。外泌体装载了“发生细胞”的多种信号分子，如DNA、RNA、蛋白质、脂质等[3]，并通过与受体细胞的细胞膜融合，将信号分子传递给受体细胞，进而调控受体细胞的生理及病理过程[4]。外泌体具有较低的免疫原性，不引起炎症反应，能够穿过血脑屏障，并且双层膜结构对其携带的内含物有很好的保护作用[5]。2015 年，Toffoli等[6]发现，用外泌体运送阿霉素可在有效抑制乳腺癌生长的同时，显著减少药物在心脏的聚集，降低药物的心脏毒性。Mao 等[2]研究发现，外泌体运送人食管癌相关基因4(esophageal cancer related gene 4，ECRG4)mRNA，可有效抑制口腔鳞癌的生长。Xie 等[7]研究发现，miR-101-3p 过表达的骨髓间充质干细胞外泌体能显著抑制口腔鳞癌的增殖、侵袭及迁移。因此，以外泌体为载体，运送肿瘤抑制基因或化学药物对口腔鳞癌的靶向治疗具有重要的意义。

    微小RNA(microRNA，miR)-1 是在肺癌[8]、胃癌[9]、食管癌[10]、前列腺癌[11]等肿瘤组织中显著低表达的非编码RNA，增强miR-1 的表达可显著抑制肿瘤细胞生长、增殖，促进肿瘤细胞凋亡。miR-1 对口腔鳞癌细胞的抑制作用已在SCC-4 细胞系中得以证实[12]，是极具潜力的一种肿瘤抑制因子。如何使miR-1在外泌体中大量富集以及外泌体的大规模量化生产是外泌体用于口腔鳞癌治疗的技术难点。本研究用供体细胞基因过表达的方法，通过基因工程技术调控外泌体中miR-1的表达，研究外泌体介导的miR-1基因运送在口腔鳞癌治疗中的作用，旨在为探索安全高效的口腔鳞癌治疗方案准备条件。

    1 材料和方法

    1.1 实验材料

    miR1 过表达质粒pri-miR1-3p-pLVX 由本实验室前期构建，人胚胎肾细胞(human embryonic kidney cell，HEK)293 及人舌鳞癌细胞CAL-27 细胞购自中国医学科学院基础医学研究所细胞中心 ......