白细胞介素12基因的体外抗结肠癌效应

http://www.100md.com 2004年8月1日 邢春根 钱建新 周丽英 陈易人

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     摘要：目的 构建共表达P35、P40二个亚基的逆转录病毒载体(Rv-mIL12)、建立PA317-mIL12包装细胞系并评估其IL12的生物学活性及经PA317-mIL12作用后淋巴细胞对结肠癌细胞(C26)的体外杀伤作用。方法 将经PCR扩增mIL12 P³⁵、P⁴⁰获取的P³⁵和P⁴⁰双亚基cDNA片段与经NotI及SalI酶切的逆转录病毒载体(PL-P35-P-P40-SN)DNA在T4噬菌体DNA连接酶作用下进行粘端连接反应。然后将构建的pGCXEXPN-mIL12经电穿孔法转录单嗜性逆转转录病毒包装细胞系(PE501),再以其病毒上清加Polybrene感染PA317,筛选出病毒滴度最高的携有mIL12逆转录病毒载体的包装细胞系：PA317-mIL12。采用脾淋巴细胞增殖去检测PA317-mIL12的生物学活性。另外,将PA317-mIL12、淋巴细胞以及人结肠癌细胞(LOVO)按不同浓度比体外共同培养,采用MTT法检测经PA317-mIL12作用后的淋巴细胞对LOVO的杀伤率。结果 经筛选的携有mIL12逆转录病毒载体包装细胞系PA317-mIL12的上清mIL12浓度达27ng/(10⁶cells·48h),其促脾淋巴细胞增殖的生物学活性也与mIL12标准品活性相近,已经PA317-mIL12作用后的淋巴细胞体外杀伤试验结果则显示：随着PA317-mIL12浓度的增高,其淋巴细胞对结肠癌细胞杀伤作用也逐渐增强,与对照组相比统讦学有显著性差异(P<0.05)。结论 PA137-mIL12体外能有效表达mIL12且具有较好的生物学活性；经PA317-mIL12作用的淋巴细胞对结肠癌细胞的杀伤作用明显提高。关键词：白细胞介素12基因；结肠癌；抗肿瘤效应中图分类号：R735.3405 文献标识码：A 文章编号：1000-5749(2004)04-0436-04

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