pcDNA3．0／mbcl—2a真核表达载体的构建及其在L929细胞中的表达与实验研究
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摘要：目的 构建重组真核表达载体pcDNA3.0/mbcl—2a，并在L929细胞中稳定表达，研究mbcL-2a基因表达对L929细胞生物学行为的影响。方法 用PCR法从含mbcl—2a基因的载体pORF—mbcl—2a获得目的基因片段，正向克隆入真核表达质粒pcDNA3.0中。pcDNA3.0/mbcl—2a以脂质体法转染L929细胞，经C418加压筛选，获得阳性单克隆细胞，用RT—PCR检测克隆细胞中mbcl—2a基因的转录，细胞免疫组化染色法检测蛋白表达。台盼兰拒染法进行活细胞计数，判定细胞增殖速率；MTT比色法测定化疗药物阿霉素对细胞生长的抑制率，并分析药物敏感性。结果 构建了重组真核表达载体pcDNA3.0/mbcl—2a，并在L929细胞中稳定表达，获得了可稳定表达mbcl-2a基因的L929细胞株。L929细胞转mbcl-2a基因后，其增殖速率高于对照组，而药物敏感性低于对照组。结论 pcDNA3.0/mbcl—2a在1929细胞中可稳定表达，对L929细胞的增殖和药物敏感性均具有一定的影响，为进一步研究mbcl—2a基因的生物学功能奠定了基础。
关键词：mbcl—2a；基因转染；细胞增殖；MTT；药物敏感性
中图分类号：R394.8 文献标识码：A 文章编号：1000—5749(2004)05—0602—05
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