内皮抑素重组腺病毒载体的构建及制备

http://www.100md.com 2004年10月1日 张子祥 李德春 赵 华 朱兴国

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     摘要：目的 构建鼠源性内皮抑素(mEndostatin)重组腺病毒真核表达载体，为下一步研究其在体外表达及动物实验研究提供基础。方法 以mEndostatin质粒为模板通过PCR方法扩增回收mEndostatin，并在其5′端引入 M-成瘤蛋白信号肽。将mEndostatin连接到腺病毒载体pCA13中，构建pCA13-mEnd。表达质粒。将此表达质粒，与腺病毒重组质粒pBGHE3通过Lipofectamine 2000共同转染293细胞，经同源重组产生重组腺病毒Ad—mendo。纯化后重组腺病毒Ad-mEndo在293细胞大量扩增并通过氯化铯密度梯度离心法纯化、测定其滴度。结果 扩增得到的mendostatin经酶切鉴定、PCR扩增、DNA测序证实为鼠源性内皮抑素，重组腺病毒Ad—mEndo的滴度为6.3×10¹⁰pfu/ml。结论 该实验为今后研究重组腺病毒mEndostatin用于恶性肿瘤的基因治疗打下了基础。

    关键词：内皮抑素；腺病毒；真核表达

    中图分类号：R394.8 文献标识码：A 文章编号：1000—5749(2004)05—0654—03

    http://www.100md.com/html/paper/1000-5749/2004/05/25.htm

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