体外分离、培养大鼠脑微血管内皮细胞的若干问题
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摘要：目的 建立一种程序简便、经济、获得细胞纯度较高的体外分离、培养大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)的方法。方法 以SD大鼠为实验材料，采用两步滤过法获得微血管段，胶原酶消化，低分子右旋糖苷密摩离心获得BMECs，接种后4 h换液使获得的细胞纯化。倒置显微镜下观察细胞的形态，细胞Ⅷ因子相关抗原(ⅧF-Ag)免疫细胞化学法鉴定细胞及其纯度，通过碱性磷酸酶(AKP)的表达来分析BMECs被微动脉和微静脉污染的程度，通过测定BMECs分泌ET-1的量，鉴定培养的BMECs活力。结果 经分离培养获得的BMECs在倒置显微镜下呈多角形或“铺路石”形，单层贴壁生长。培养的细胞Ⅷ因子相关抗原免疫组化试验阳性，细胞纯度为90%。AKP染色阳性细胞百分比为93%，总积分112。原代培养内皮细胞的ET-1含量为388.03 pg/ml，传代后为591.75 pg/ml。结论 采用两步滤过法获得脑微血管段，胶原酶消化，低分子量右旋糖苷密度离心可分离和培养大鼠BMECs。该方法较其他方法程序简单，获得细胞纯度高。
关键词：脑微血管内皮细胞；细胞培养；纯度；活力
中图分类号：R329.2；R743 文献标识码：A 文章编号：1000—5749(2004)05—0657—04
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