江承平，王晓明，吴碧华，刘 福

    (川北医学院附属医院，南充市 637007)

    近年来免疫炎症反应在脑缺血再灌注损伤中所起的作用逐渐受到关注。脑缺血再灌注过程中，在黏附分子的介导下，循环中的白细胞和脑微血管内皮细胞黏附、积聚、浸润于缺血区脑组织，释放炎症介质从而加重缺血神经元的损伤。CD4+、CD8+T淋巴细胞可反映机体免疫状态的变化，抑肽酶是从牛肺中提取的一种广谱丝氨酸蛋白酶抑制剂，具有非特异性丝氨酸蛋白酶抑制活性，在体外循环大手术出血、胰腺炎、缺血再灌注损伤等方面有多种作用。自加拿大“BART”研究发表后，由于对临床使用的抑肽酶商品安全性存在疑问，包括拜耳公司的特斯乐(Trasylol)在内的抑肽酶制剂相继暂停美国、欧洲和中国市场(我国于2007年暂停使用)的销售，但其生理病理作用值得进一步研究。本文拟研究大鼠脑损伤后不同时期损伤灶局部CD4+、CD8+T淋巴细胞浸润情况的变化，探讨抑肽酶在细胞免疫应答的干预下，对脑缺血再灌注后继发性脑损伤的保护作用。

    1 材料与方法

    1.1 试药

    抑肽酶(丽珠集团丽宝生物化学制药有限公司，批号：081023，规格：100万KIU·mL-1)；免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)法试剂盒(北京博奥森生物技术有限公司)；兔抗鼠CD4+、CD8+单克隆抗体、即用型二氨基联苯胺(DAB)试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)。

    1.2 仪器

    动物头颅立体定位仪(西安光学医疗器械公司)；光学显微镜(日本Olympus公司)。

    1.3 动物及分组

    健康♂SD大鼠105只，体质量280～320 g，由川北医学院实验动物中心提供，许可证号：SCXK(川2008-18)，所有大鼠随机分为3组：假手术组、模型组、抑肽酶组，每组35只。

    1.4 模型制作

    大鼠局灶性脑缺血再灌注模型参照Longa等[1]报道的方法，以大鼠清醒后左前肢不能完全伸展、爬行时向左侧转圈为模型成功标准。假手术组除尼龙线插入深度<15 mm外 ......