陈 芳，杨 李，王晓昆，张 宜(广州军区武汉总医院医学实验科，武汉市 430070)

    半夏为天南星科植物半夏Pinellia ternata(Thunb.)Breit.的干燥块茎，具有燥湿化痰、降逆止呕、消痞散结之功效。临床上可单独或与其他药物配伍用于治疗食管癌、肝癌等。近年来研究半夏对肝癌的保护作用发现，其作用主要是通过杀伤癌细胞、抑制细胞生长、诱导细胞凋亡、调节机体免疫功能来实现的[1，2]。半夏生物碱是半夏的主要有效成分之一，为进一步考察半夏生物碱抗肝癌的药理活性，笔者对半夏生物碱影响人肝癌细胞株Bel-7402增殖的作用与机制进行了初步研究。

    1 仪器与材料

    1.1 仪器

    CK2-TR型倒置显微镜、BX-51型荧光显微镜(日本Olympus公司)；RT2100C型酶标仪(美国Rayto公司)；CA-1800型超净工作台(上海上净净化设备有限公司)；5420型CO2培养箱(日本三洋公司)。

    1.2 试药

    半夏生物碱粉末(广州军区武汉总医院医学实验科)；MTT(美国Amersco公司)；胰蛋白酶、RPMI1640培养基(美国Gibco公司)；胎牛血清(杭州四季青生物工程有限公司)；细胞凋亡原位检测(TUNEL)试剂盒、免疫组化SABC试剂盒、B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl-2)兔免疫球蛋白G(IgG)多抗、Bcl-2相关X蛋白(Bax)兔IgG单抗均购自武汉博士德生物工程有限公司。

    1.3 细胞

    人肝癌细胞系Bel-7402由武汉大学中国典型培养物保藏中心提供，以RPMI1640培养液于CO2培养箱中培养。

    2 方法

    2.1 溶液的制备与细胞的培养

    将40 mg半夏生物碱粉末溶于含10%胎牛血清的1640培养基10 mL中，得终浓度为4 mg·mL-1的半夏生物碱贮备液，过滤后依次用细胞培养基稀释为400、200、100μg·mL-1的应用液，现配现用。MTT以PBS配成5 g·mL-1的浓度，经抽滤后分装入无菌微量离心管(EP规格：1 mL)中，封口，-20℃贮藏。胰蛋白酶以PBS配成0.25%的浓度，经抽滤后分装入无菌微量离心管(EP规格：1 mL)中，封口，-20℃贮藏。

    将Bel-7402接种于含100 u·mL-1青霉素、100 u·mL-1链霉素和10%胎牛血清的RPMI1640培养基液中，细胞浓度为2×104个/mL，置于5%CO2、37℃的培养箱中培养 ......