张延红，高素芳，王 燕，李金田，杜 弢(甘肃中医药大学药学院，兰州 730000)

    当归种子蛋白质提取方法及SDS-PAGE技术体系研究Δ

    张延红*，高素芳，王 燕，李金田，杜 弢#(甘肃中医药大学药学院，兰州 730000)

    目的：建立适用于当归种子蛋白质提取及十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)的技术体系，为当归种子蛋白质研究和品种纯度检测提供技术支撑。方法：以蛋白质含量和电泳条带数量等为指标，采用浓缩胶法、盐溶蛋白法、电极缓冲液法、二巯基苏糖醇(DTT)法、尿素法、巯基乙醇法、三羟甲基氨基甲烷(Tris)法、丙酮沉淀法等8种方法提取当归种子蛋白质，筛选最优提取方法；再以最优提取方法为基础，考察不同料液比、样品稀释倍数(上样量)和分离胶浓度对当归种子蛋白质提取及SDS-PAGE效果的影响。结果：8种提取方法中以巯基乙醇法提取蛋白质的含量较高(29.931mg/g)，且电泳条带数目多、泳道背景清晰；当以巯基乙醇法为最优提取方法时，料液比为1∶10、上样量为5倍、分离胶浓度为15%条件下电泳效果最好，共得到18条条带。结论：建立的蛋白质提取方法和SDS-PAGE技术体系适用于当归种子纯度的检测。

    当归；种子；蛋白质提取；SDS-PAGE

    蛋白质是基因表达的产物，能反映生物DNA组成上的差异，几乎所有植物种子都具有特异性种子蛋白，其电泳谱带具有高度的稳定性、专一性。蛋白质电泳技术就是根据种子蛋白的这些特点，利用电泳谱带的多态性来鉴定品种的真实性和纯度。此外，种子蛋白作为遗传标记常被用于种属间关系、品种鉴定及植物繁育系统的鉴别。种子检验是保证种子质量的重要措施，采用电泳分离的蛋白图谱检测农作物种子纯度已有文献报道[1-2]。利用种子蛋白质电泳图谱鉴定种子纯度具有不需将种子萌发、送检样品可及时进行分析、电泳后的染色步骤相对简单等优点。此外，该技术还可用于测定蛋白质分子量和蛋白质浓度，是许多研究领域的重要分析技术。当归为伞形科多年生草本植物当归[Angelica sinensis(Oliv.)Diels]的干燥根[3-4]，是甘肃特色药材之一。本试验以当归种子为研究材料，对其蛋白质的提取方法及电泳条件进行研究，旨在建立适宜于当归种子蛋白质提取和电泳的技术体系，为当归种子蛋白质研究和品种纯度检测提供技术支撑。

    1 材料

    1.1 仪器

    DYY-10C型电泳仪、DYCZ-23A型垂直电泳槽(北京市六一仪器厂)；BX7200HP超声波清洗器(上海新苗医疗器械制造有限公司)；TGL16M型高速冷冻离心机(湖南凯达科学仪器有限公司) ......