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编号:13563776
知母皂苷B对缺氧/复氧损伤星形胶质细胞的保护作用及其机制研究(3)
http://www.100md.com 2019年2月15日 《中国药房》 20194
     将“2.1”项下经传代、纯化后的星形胶质细胞以5×104个/mL的密度接种至24孔板中,于37 ℃、5%CO2培养箱中培养24 h后,进行标志蛋白GFAP染色,使用免疫荧光法进行鉴定。将细胞置于4%多聚甲醛中固定15 min,以胎牛血清封闭2 h后,加入GFAP一抗(1 ∶ 100),于4 ℃反应24 h后,用PBS反复冲洗4次,每次15 s;随后加入经FITC标记的相应二抗(1 ∶ 100),于37 ℃下避光反应1 h,用DAPI染料60 μL染核3 min后,以中性树脂封片,于显微镜下观察并拍照,观察细胞的形态与分布[GFAP染色阳性(即发出绿色荧光),且细胞扁平,可见突起]。

    2.3 分组、给药和造模

    取对数生长期细胞,以5×104个/mL的密度接种至24孔板中,于37 ℃、5%CO2培养箱中培养24 h后,随机分为正常组、模型组、阳性对照组(尼莫地平10 μmol/L)和知母皂苷B低、中、高剂量组(1、10、100 μmol/L),各给药组剂量均参照本课题组前期预试验结果。每组设置9个复孔。正常组和模型组细胞均加入不含药物的完全培养基1 000 μL,各给药组加入含相应药物的完全培养基1 000 μL,于37 ℃、5%CO2培养箱中培养24 h ......
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