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编号:13559822
4—羟基苯并噁唑—2—酮对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的改善作用及机制研究(3)
http://www.100md.com 2019年3月15日 《中国药房》 20196
     采用速率法以全自动生化分析仪检测各组大鼠血清中ALT、AST含量,采用ELISA法以酶标仪检测各组大鼠血清中IL-1β、IL-10含量,严格按照相应试剂盒说明书操作。

    2.4 大鼠肝组织中NF-κB p65、TNF-α、IL-6、ICAM-1蛋白表达的检测

    采用免疫组化法检测大鼠肝组织中NF-κB p65蛋白的表达情况,参照SP检测试剂盒及相应抗体说明书操作:将大鼠肝组织切片(厚度约为4~5 μm),经常规脱蜡、水化后,行高压抗原热修复,滴加正常山羊血清封闭液,室温封闭20 min,甩除多余液体,滴加NF-κB p65单克隆抗体(1 ∶ 1 000),4 ℃孵育过夜,以磷酸盐缓冲液(PBS,pH 7.4,下同)清洗3次,每次5 min;滴加相应生物素标记的山羊抗兔IgG二抗(1 ∶ 10 000),滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液适量,室温孵育30 min,以PBS清洗3次,每次5 min,用二氨基联苯胺溶液显色,用水清洗,经苏木精复染、脱水、透明、干燥后,以中性树脂封片,置于显微镜下观察(棕黄色区域为NF-κB p65表达阳性),每张切片随机选取5个高倍视野(×400),采用Image Pro-plus 6.0软件分析并计算其平均光密度 ......
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