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编号:13557170
苗药良姜胃疡胶囊对胃溃疡模型大鼠的预防作用及机制研究(3)
http://www.100md.com 2019年4月1日 《中国药房》 20197
     造模1 h后,各组另取4只大鼠麻醉,取胃组织沿胃大弯剪开,生理盐水洗净,滤纸吸干,每组称取胃组织300 mg,用眼科剪于冰浴上剪碎,加入8倍量的RIPA裂解液,裂解30 min,收集于1.5 mL的离心管中,4 ℃条件下,12 000 r/min离心(离心半径为7 cm)10 min,收集上清液,即得总蛋白提取液。采用二喹啉甲酸(BCA)法对总蛋白提取液进行蛋白浓度测定,经蛋白上样缓冲液稀释后,100 ℃沸水变性,备用。每组取蛋白样品20 μg进行聚丙烯酰氨凝胶电泳,电泳结束后转移至聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上,以5%脱脂奶粉置于摇床上封闭1 h,加入相应一抗[p-NF-κB p65(1 ∶ 1 000)、NF-κB p65(1 ∶ 1 000)、p-IκBα(1 ∶ 1 000)、IκBα(1 ∶ 1 000)、β-actin(1 ∶ 5 000)],4 ℃孵育过夜,次日用TBST洗膜3次,每次5 min;加入二抗[HRP-IgG(1 ∶ 5 000)],室温孵育1 h,然后TBST洗膜3次,每次5 min,然后进行显影处理 ......
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