摘 要 目的：優化两种重组蛋氨酸酶表达的诱导条件，并探讨其对宣威人肺腺癌细胞GLC的抑制作用。方法：将重组蛋氨酸酶表达质粒PGEX-4T1-4A1-MGL和PGEX-4T1-3B8-MGL转染至感受态大肠杆菌DH5α中，用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达。以目标蛋白表达量为指标，采用单因素试验对诱导前菌液起始光密度(OD600 nm)值、培养温度、诱导时间等诱导条件进行优化。采用亲和层析法对所得重组蛋氨酸酶4A1-MGL、3B8-MGL进行纯化；采用考马斯蓝法检测其质量浓度，十二烷基苯磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测其纯度，分光光度法检测其活性。采用MTT法检测经低、中、高剂量重组蛋氨酸酶(4A1-MGL和3B8-MGL分别均为0.1、0.2、0.4 U/mL)作用24、48、72 h后的细胞增殖情况，并计算细胞抑制率。结果：两种重组蛋氨酸酶表达的最优诱导条件为菌液起始OD600 nm值0.9、培养温度37 ℃、诱导时间5 h。验证试验结果显示，4A1-MGL、3B8-MGL的蛋白表达量分别为1.52±0.04、1.28±0.03(RSD<3% ......