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编号:13530137
串联质谱法在合成多肽药物结构确证中的应用进展(2)
http://www.100md.com 2019年10月15日 《中国药房》 201920
     1.2.3 氨基酸序列分析 与其他分子一样,化学成分的阐明是确定肽同一性的基础,包括阐明氨基酸及其在肽链中的排列顺序,即一级结构/序列。传统氨基酸测序方法为Edman降解法,但该方法一般用来测定N端氨基酸;此外,Edman测序和串联质谱相结合也是目前常用的一种方法,可用于阐明含有二硫键的复杂肽,例如降钙素鲑鱼的一级结构[17]。采用串联质谱法测定肽序列时通常使用碰撞诱导解离(CID)碎裂技术,但如果序列覆盖度差,应考虑采用其他的质谱碎裂技术[18-23](见表1)。对于含有20个以上氨基酸残基的长肽,如不能直接确定其序列,可进行多肽肽图的分析,分析过程一般是用专一性较强的蛋白水解酶(一般为肽链内切酶)对多肽进行水解,再用液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)确定各肽段。

    1.2.4 二硫键分析 正确的二硫键数目和位置是多肽和蛋白质产生生物活性的结构保证,在对合成或天然多肽产品研究的过程中,二硫键的分析是需要考察的重要内容之一。合成多肽药物分子中如含有二硫键,一般先采用还原试剂如二硫代硫醇(DTE)、二硫苏糖醇(DTT)或三(2-羧乙基)膦(TCEP)对这类药物进行还原,然后进行质谱分析,通过比较还原前后的质量差可确定其含有的二硫键数目。其中 ......
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