基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路研究黄连素对小鼠巨噬细胞极化的干预作用(3)
2.3.2 细胞中TLR4、MyD88 mRNA的表达量 采用实时荧光定量PCR法检测。取“2.2”项下各组细胞适量，用PBS清洗后，采用TRIzol法提取细胞总RNA，使用紫外分光光度计检测RNA的纯度和浓度(当RNA的A260 nm/A280 nm为1.8～2.0时，才能进行后续试验[12])。按 cDNA合成试剂盒说明书操作，将mRNA逆转录为cDNA并进行PCR扩增。PCR反应体系(20 μL)：cDNA模板4 μL、上/下游引物(序列见表1)各2 μL、SYBR荧光染料10 μL、无核酸酶水2 μL;反应条件：94 ℃预变性5 min;94 ℃变性30 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共40个循环。以GAPDH作为内参，生成扩增曲线和熔解曲线，使用Image J v1.5.1软件分析并采用2-ΔΔCt法计算TLR4、MyD88 mRNA的相对表达量。上述试验重复6次。2.3.3 细胞中TLR4、MyD88、iNOS、CD206蛋白的表达量 采用Western blotting法检测 ......
您现在查看是摘要页，全文长 4249 字符。