2.4 龙胆苦苷对PANC-1细胞克隆形成的影响考察

    采用克隆形成试验进行测定。收集对数生长期PANC-1细胞，以0.25%胰酶消化后制成細胞悬液，按500个/皿接种于60 mm培养皿中，按“2.3”项下方法分组、给药，培养72 h。吸弃培养皿中培养液，更换为无药新鲜培养基后继续培养，直至每个培养皿中均出现50个以上克隆即终止试验。将培养皿中培养基小心倒弃，以磷酸盐缓冲液(PBS)漂洗细胞3 min×2～3次，甲醇固定20 min，再用Giemsa溶液染色15 min，然后置于倒置显微镜下计数大于50个细胞的克隆数。按照公式计算克隆形成率：克隆形成率(%)=克隆数/接种细胞数×100%。

    2.5 龙胆苦苷对PANC-1细胞凋亡的影响考察

    采用Hoechst 33258荧光染色法进行测定。收集对数生长期PANC-1细胞，以0.25%胰酶消化后制成密度为2×105个/mL的细胞悬液，以2 mL/孔接种于6孔板中，按“2.3”项下方法分组、给药 ......