硝化应激对小鼠肝原代细胞损伤及机制研究(2)
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2.2ONOO-供体SIN-1刺激及ONOO-清除剂对肝原代细胞损伤作用： 收集各处理组细胞的培养基，检测培养基中LDH的活性。结果显示SIN-1作用组LDH活性较对照组显著增加；同时加入ONOO-清除剂FeTMPyP后细胞培养基中LDH活性明显下降，与正常组无统计学差异(图2)。
2.3 Western Blot法检测各处理组细胞内NT的表达水平：
细胞刺激24h后，提取各组细胞蛋白，用Western Blot法对各组蛋白中NT水平进行检测，发现SIN-1刺激细胞后，细胞蛋白中NT的表达水平明显升高，加入清除剂后NT的水平降至正常水平(图3)。
注：*，P<0.05，vs.control组；#，P<0.05，vs.SIN-1组
图3 ONOO-供体SIN-1刺激及清除剂FeTMPyP干预对肝脏原代细胞内NT含量的影响
3讨论
硝化应激参与了多种肝脏疾病的病理生理过程。有研究表明在酒精性肝病的发生发展过程中硝化应激参与了肝脏组织的损伤[7]，在体内发生氧化应激的同时，体内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达也明显升高，导致体内硝化应激的发生。ONOO-既是一种强氧化剂，又可以作为硝化剂，硝化蛋白质，影响蛋白质酪氨酸激酶、丝裂原活化蛋白激酶等信号分子的级联反应，从而导致基因转录和蛋白质活性的改变，产生细胞损伤及参与一系列病理生理过程。本研究采用的是离体培养的原代肝细胞，该模型较好的模拟了在生物体内肝细胞在硝化应激情况下的损伤表现 ......
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