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编号:13165976
淫羊藿苷对线粒体损伤模型大鼠脑内β淀粉样蛋白和神经营养因子的影响(2)
http://www.100md.com 2013年5月1日 《中国中药杂志》 2013年第9期
     2.4 Aβ142含量测定 大鼠大脑皮层按照1∶4的比例加入50 mmol·L-1 TrisHCl(pH 8.0)匀浆液在冰浴上匀浆。取0.5 mL匀浆液入试管中,加入0.5 mL的10 mmol·L-1盐酸胍,以漩涡混匀器充分混匀后,室温下摇床摇3.5 h。4 ℃ 14 000×g离心25 min,取上清分装,冻存于-20 ℃冰箱待测。测定时,样品于4 ℃解冻,BCA法定蛋白浓度,按照ELISA试剂盒说明书测定大鼠大脑皮层中Aβ142的含量。

    2.5 Western blot法检测APP和NGF蛋白表达 提取海马总蛋白,以βactin作为等量蛋白质上样对照,取50~80 μg蛋白质样品进行SDSPAGE电泳,转至硝酸纤维素膜上,室温封闭1 h后,用含0.01%聚氧乙烯脱水山梨醇单月桂酸酯(吐温20)的TBS缓冲液(TBST) 漂洗3次,每次10 min;分别加入相应的APP抗体、NGF抗体(1∶1 000 ......
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