基于近红外光谱的丹红注射液提取过程质量在线检测方法研究(1)
[摘要] 目的：应用近红外透射光谱法，建立丹红注射液提取过程中关键指标的快速定量分析方法。方法：在线采集丹参和红花2种药材混合提取过程的近红外光谱图，以高效液相色谱(HPLC)和差重法为参照，采用偏最小二乘回归(PLSR)法分别建立迷迭香酸、丹酚酸B、紫草酸、羟基红花黄色素A和固含量的定量校正模型。结果：校正模型的交叉验证相关系数(Rcv)和交叉验证均方根偏差(RMSECV)分别为：迷迭香酸 0.909 3， 0.012 1 g·L-1；丹酚酸B 0.915 2， 0.251 g·L-1；紫草酸 0.901 9， 0.017 7 g·L-1；羟基红花黄色素A 0.747 7， 0.038 1 g·L-1；固含量 0.931 4， 0.359。结论：利用近红外光谱技术可以实现丹红注射液原料药材提取过程中迷迭香酸、丹酚酸B、紫草酸和固含量的快速检测，羟基红花黄色素A的定量校正模型有待进一步完善。
[关键词]近红外光谱；提取过程；在线监测；丹红注射液
, 百拇医药
[稿件编号] 20130331017
[通信作者] *瞿海斌，教授，Tel： ( 0571 ) 88208428，E-mail：quhb@zju.edu.cn
提取过程是大多数中药制药过程的起点，直接关系到药材的利用率和最终产品的质量。目前，提取工艺的质量控制主要依靠经验，因此研究发展中药提取过程中活性成分含量的快速测定方法对于中药工业技术进步和产品质量升级具有现实意义。
近红外光谱技术作为一种快速、无损的绿色分析技术，具有样品处理简单、无需试剂消耗等特点[1-3]，已经被成功应用于食品、药物、石油等领域[4-7]。近年来，近红外光谱技术已经越来越多地被应用于中药研究，包括药材基源、产地、优劣、真伪及生产厂家鉴别[8]、有效组分含量测定[9-10]和中药制药工艺过程的在线监测[11]。
, 百拇医药
丹红注射液是中药丹参、红花按科学配方提取、精制而得的复方制剂，用于缓解心绞痛症状，改善心肌缺血情况。本研究以丹参、红花混合提取过程为研究对象，建立关键指标迷迭香酸(RA)、丹酚酸B(SaB)、紫草酸(LA)、羟基红花黄色素A(HSYA)和固含量(SSC)的快速定量分析模型，为实现丹红注射液提取过程在线质量监控提供实验依据。
1 材料
Antaris型傅立叶变换近红外光谱仪(美国Thermo Nicolet公司)， 附件配置：透反射可调光程探头(S-650，美国ThermoNicolet公司)； Agilent 1200高效液相色谱仪(美国Agilent公司)， 包括四元泵、在线脱气装置、自动进样器、UV检测器、柱温箱和Chemstation工作站；DZF-6050真空干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)；精密电子天平(德国Mettler-Toledo公司)。
丹参药材产地山东，购自浙江天天好大药房连锁有限公司、海王星辰连锁药店(批号121106，121206)，红花药材产地新疆，购自浙江天天好大药房连锁有限公司；迷迭香酸 (批号120407)、紫草酸 (批号120526)对照品(上海融禾医药科技有限公司)；丹酚酸B对照品(批号12041203，成都普瑞法科技开发有限公司)；羟基红花黄色素A对照品(批号1125987，阿拉丁试剂有限公司)；Mili-Q水(法国Milford公司)； 色谱纯乙腈(德国Merck公司)； 色谱纯甲酸(美国ROE Scientific公司)； 色谱纯甲酸铵(天津阿法埃莎化学有限公司) 。
, 百拇医药
2 方法
2.1 样品制备 丹参和红花2种药材按质量3∶1配比，共200 g，加10倍量纯化水于4 L提取罐中，提取罐使用夹套油浴控温。当提取罐内温度达到80 ℃时开始采集提取液样品，样品采集的时间间隔为5 min，当到达设定的提取温度(100 ℃)后开始保温，保温1 h。重复5批丹参、红花药材的提取实验，记为批次A，B，C，D，E，其中每个批次红花来源相同，A，B批次丹参来自海王星辰连锁药店(批号 121206)，C，D批次丹参来自海王星辰连锁药店(批号121106)，E批次丹参来自浙江天天好大药房连锁有限公司，每批次的实验都以相同方式取样和采集光谱。自批次A至批次E，按照样品采集时间的先后顺序对样品进行编号，共得95个样品。
2.2 近红外光谱采集 采集2.1中丹红提取过程样品的透射光谱，光谱扫描范围10 000～4 000 cm-1，扫描次数64次，分辨率4.0 cm-1，实验采用空气为参比。
, http://www.100md.com
2.3 HPLC分析 迷迭香酸、丹酚酸B、紫草酸和羟基红花黄色素A含量用HPLC测定[12]。色谱条件：Zorbax Eclipse Plus C18色谱柱(4.6 mm×100 mm，1.8 μm)；流动相A为甲酸-500 mmol·L-1甲酸铵-水(0.5∶10∶90)(每1 L含5 mL甲酸，50 mmol甲酸铵)，流动相B为0.5%甲酸-乙腈，梯度洗脱，0～10 min，2%～9%B，10～13 min，9%～10%B，13～20 min，10%～17%B，20～37 min，17%～20%B，20～37 min，17%～20%B，37～47 min，20%～25%B，47～50 min，25%～80%B；柱温30 ℃；紫外检测波长0～15.9 min，280 nm，15.9～17.9 min，380 nm，17.9～50 min，280 nm；流速0.5 mL·min-1。, 百拇医药(刘爽悦， 李文龙， 瞿海斌， 赵步长， 赵涛)
[关键词]近红外光谱；提取过程；在线监测；丹红注射液
, 百拇医药
[稿件编号] 20130331017
[通信作者] *瞿海斌，教授，Tel： ( 0571 ) 88208428，E-mail：quhb@zju.edu.cn
提取过程是大多数中药制药过程的起点，直接关系到药材的利用率和最终产品的质量。目前，提取工艺的质量控制主要依靠经验，因此研究发展中药提取过程中活性成分含量的快速测定方法对于中药工业技术进步和产品质量升级具有现实意义。
近红外光谱技术作为一种快速、无损的绿色分析技术，具有样品处理简单、无需试剂消耗等特点[1-3]，已经被成功应用于食品、药物、石油等领域[4-7]。近年来，近红外光谱技术已经越来越多地被应用于中药研究，包括药材基源、产地、优劣、真伪及生产厂家鉴别[8]、有效组分含量测定[9-10]和中药制药工艺过程的在线监测[11]。
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丹红注射液是中药丹参、红花按科学配方提取、精制而得的复方制剂，用于缓解心绞痛症状，改善心肌缺血情况。本研究以丹参、红花混合提取过程为研究对象，建立关键指标迷迭香酸(RA)、丹酚酸B(SaB)、紫草酸(LA)、羟基红花黄色素A(HSYA)和固含量(SSC)的快速定量分析模型，为实现丹红注射液提取过程在线质量监控提供实验依据。
1 材料
Antaris型傅立叶变换近红外光谱仪(美国Thermo Nicolet公司)， 附件配置：透反射可调光程探头(S-650，美国ThermoNicolet公司)； Agilent 1200高效液相色谱仪(美国Agilent公司)， 包括四元泵、在线脱气装置、自动进样器、UV检测器、柱温箱和Chemstation工作站；DZF-6050真空干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)；精密电子天平(德国Mettler-Toledo公司)。
丹参药材产地山东，购自浙江天天好大药房连锁有限公司、海王星辰连锁药店(批号121106，121206)，红花药材产地新疆，购自浙江天天好大药房连锁有限公司；迷迭香酸 (批号120407)、紫草酸 (批号120526)对照品(上海融禾医药科技有限公司)；丹酚酸B对照品(批号12041203，成都普瑞法科技开发有限公司)；羟基红花黄色素A对照品(批号1125987，阿拉丁试剂有限公司)；Mili-Q水(法国Milford公司)； 色谱纯乙腈(德国Merck公司)； 色谱纯甲酸(美国ROE Scientific公司)； 色谱纯甲酸铵(天津阿法埃莎化学有限公司) 。
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2 方法
2.1 样品制备 丹参和红花2种药材按质量3∶1配比，共200 g，加10倍量纯化水于4 L提取罐中，提取罐使用夹套油浴控温。当提取罐内温度达到80 ℃时开始采集提取液样品，样品采集的时间间隔为5 min，当到达设定的提取温度(100 ℃)后开始保温，保温1 h。重复5批丹参、红花药材的提取实验，记为批次A，B，C，D，E，其中每个批次红花来源相同，A，B批次丹参来自海王星辰连锁药店(批号 121206)，C，D批次丹参来自海王星辰连锁药店(批号121106)，E批次丹参来自浙江天天好大药房连锁有限公司，每批次的实验都以相同方式取样和采集光谱。自批次A至批次E，按照样品采集时间的先后顺序对样品进行编号，共得95个样品。
2.2 近红外光谱采集 采集2.1中丹红提取过程样品的透射光谱，光谱扫描范围10 000～4 000 cm-1，扫描次数64次，分辨率4.0 cm-1，实验采用空气为参比。
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2.3 HPLC分析 迷迭香酸、丹酚酸B、紫草酸和羟基红花黄色素A含量用HPLC测定[12]。色谱条件：Zorbax Eclipse Plus C18色谱柱(4.6 mm×100 mm，1.8 μm)；流动相A为甲酸-500 mmol·L-1甲酸铵-水(0.5∶10∶90)(每1 L含5 mL甲酸，50 mmol甲酸铵)，流动相B为0.5%甲酸-乙腈，梯度洗脱，0～10 min，2%～9%B，10～13 min，9%～10%B，13～20 min，10%～17%B，20～37 min，17%～20%B，20～37 min，17%～20%B，37～47 min，20%～25%B，47～50 min，25%～80%B；柱温30 ℃；紫外检测波长0～15.9 min，280 nm，15.9～17.9 min，380 nm，17.9～50 min，280 nm；流速0.5 mL·min-1。, 百拇医药(刘爽悦， 李文龙， 瞿海斌， 赵步长， 赵涛)