人参AGO1基因的克隆及序列分析(2)
2.3 表达检测 分别提取五年生人参根、茎、叶、花和愈伤组织的RNA用于PgAGO1基因的组织表达特异性分析。cDNA第一链的合成参照Reverse Transcriptase(Invitrogen)试剂盒说明书进行。实验采用实时定量RT-PCR法，以人参保守基因Actin为内参，PCR程序如下： 95 ℃预变性30 s；95 ℃变性5 s，60 ℃退火18 s，72 ℃延伸15 s，共39个循环；融解曲线的测定从60到95 ℃。实验数据采用相对定量法处理，基因表达丰度由2-ΔΔCq公式计算得出，其中Cq代表PCR循环的阈值[12] 。PgAGO1基因在愈伤组织中的表达丰度设为1。3 结果与分析
3.1 人参PgAGO1基因的克隆与序列分析 用Trizol试剂提取的总RNA经1.2%的琼脂糖凝胶电泳检测，可见28 S及18 S rRNA 2条明显的区带且亮度比例接近2∶1 ......
您现在查看是摘要页，全文长 3569 字符。