接骨木中的木脂素类化学成分及其对UMR106细胞增殖作用的影响(1)
[摘要]研究接骨木Sambucus williamsii茎枝中的木脂素类化学成分，并讨论它们对大鼠骨肉瘤细胞UMR106增殖的影响。该研究采用D101大孔吸附树脂，硅胶，ODS，Sephadex LH-20，Toyopearl HW-40和RP-HPLC等色谱分离手段对接骨木茎枝60%乙醇提取物进行分离纯化，并运用波谱方法对所分离的化合物进行结构鉴定。从中分离鉴定了6个木脂素类化合物和1个酚酸类化合物，经波谱解析鉴定为threo-guaiacylglycerol-β-O-4′-conifery ether(1)，lirioresinol A(2)，1-hydroxypinoresinol(3)，5-甲氧基蛇菰宁(4)，蛇菰宁(5)，5-methoxy-trans-dihydrodehydrodiconiferyl alcohol(6)和对羟基苯甲醛(7)，化合物3～7首次从该属植物中分离得到。对所有分离得到的化合物进行了类成骨UMR106细胞增殖活性的测定，化合物1～7均能一定程度上促进UMR106细胞的增殖。
[关键词]接骨木；木脂素；UMR106细胞；增殖活性
, http://www.100md.com
接骨木为忍冬科接骨木属植物接骨木Sambucus williamsii Hance的干燥茎枝，分布于东北、华北、华中及四川、云南等地，其根及根皮、叶、花均供药用。又名续骨木、九节风、公道老、接骨草等，味甘、苦，性平，无毒，归肝经[1]。接骨木作为民间常用中药，具有接骨续筋，活血止痛，祛风利湿的作用，主要用于治疗骨折、跌打损伤、风湿性关节炎、痛风、大骨节病等。据《本草新编》记载：“接骨木，入骨节，专续筋接骨”，“尤以接骨为奇”[2]。目前，关于接骨木的化学成分报道主要为木脂素类、三萜类、酚酸类及环烯醚萜类[3-6]。
本课题组前期对接骨木的研究中发现，其60%乙醇提取物具有抑制去卵巢所引起的骨质疏松的活性[6]，本研究对其进行深入的化学成分研究，从中分离得到了6个木脂素类化合物和1个酚酸类化合物，通过光谱学方法鉴定了它们的结构，分别为threo-guaiacylglycerol-β-O-4′-conifery ether(1)，lirioresinol A(2)，1-hydroxypinoresinol(3)，5-甲氧基蛇菰宁(4)，蛇菰宁(5)，5-methoxy-trans-dihydrodehydrodiconiferyl alcohol(6)和对羟基苯甲醛(7)。并对所有分离得到的化合物进行了类成骨UMR106细胞增殖活性的测定，发现化合物1～7均能一定程度上促进UMR106细胞的增殖。
, 百拇医药
1 材料
LCQ Advantage MAX质谱仪(美国Finnigan 公司)，Synapt G2质谱仪(美国Waters公司)，Avance-300/400超导核磁共振仪(瑞士Bruker公司)，Varian制备型高效液相色谱。制备高效液相色谱柱为Welch C18 (21.2 mm×250 mm， 5 μm)。薄层硅胶GF254和柱色谱硅胶(青岛海洋化工厂)，薄层色谱用硅胶GF254(烟台化学工业研究所)，D101大孔树脂(天津)，ODS(日本YMC公司)，Sephadex LH-20填料(瑞典Pharmacia公司)，Toyopearl HW-40填料(Toyo Soda MFG公司)，氘代试剂(美国CIL公司)。
试验用药材采自于辽宁本溪市草河口镇。由沈阳药科大学路金才教授鉴定为S. williamsii的茎枝，标本保存于暨南大学药学院中药及天然药物研究所。
UMR106 细胞(购自American Type Culture Collection，序号CRL-1661)，酶标仪(Spectra Max 340 PC，Molecular Devices，美国)，DMEM (Dulbecco′s modified Eagle medium)培养基、phenol red-free DMEM (pf-DMEM)、胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)、charcoal-stripped FBS (sFBS)、青霉素及链霉素(美国Invitrogen公司)，MTS(美国Promega公司)，PMS(日本TCI公司)，17β-estradiol(E2，美国Sigma公司)。
, 百拇医药
2提取与分离
接骨木干燥茎枝82 kg经适当粉碎，用60%乙醇加热回流提取3次，每次2 h，合并提取液，冷冻干燥得接骨木提取物粉末(3 825 g)。以适量水混悬后，经D101大孔树脂柱色谱离，乙醇-水(0∶100， 30∶70， 50∶50， 95∶5)梯度洗脱得到JG-A～JG-D共4个部分。
JG-C取其中100.0 g进行硅胶柱色谱分离，氯仿-甲醇梯度洗脱得到11个亚流分(C1～C11)。亚流分C3经过ODS柱色谱，20%甲醇洗脱部分经HPLC制备(15%乙腈，tR7 =52.816 min)得到化合物7(18.1 mg)；40%甲醇洗脱部分经Sephadex LH-20柱色谱及HPLC制备(25%乙腈，tR2 =45.213 min)得到化合物2(4.1 mg)。亚流分C4经过ODS柱色谱分离，60%甲醇洗脱部分经Sephadex LH-20柱色谱，HW-40柱色谱及HPLC制备(27%乙腈，tR3 = 11.224 min，tR4 = 26.268 min；29%乙腈，tR5 =49.683 min)得到化合物3(5.9 mg)，4(2.1 mg)和5(14.0 mg)。亚流分C6经过ODS柱色谱分离，30%甲醇洗脱部分经HPLC制备(17%乙腈，tR1 = 40.756 min)，得到化合物1(13.1 mg)；60%甲醇洗脱部分经HW-40柱色谱及HPLC制备(23%乙腈，tR6 = 33.910 min)，得到化合物6(6.7 mg)。, 百拇医药(许蒙蒙 段营辉 肖辉辉 戴毅 王振中 黄文秀 姚新生 萧伟)
[关键词]接骨木；木脂素；UMR106细胞；增殖活性
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接骨木为忍冬科接骨木属植物接骨木Sambucus williamsii Hance的干燥茎枝，分布于东北、华北、华中及四川、云南等地，其根及根皮、叶、花均供药用。又名续骨木、九节风、公道老、接骨草等，味甘、苦，性平，无毒，归肝经[1]。接骨木作为民间常用中药，具有接骨续筋，活血止痛，祛风利湿的作用，主要用于治疗骨折、跌打损伤、风湿性关节炎、痛风、大骨节病等。据《本草新编》记载：“接骨木，入骨节，专续筋接骨”，“尤以接骨为奇”[2]。目前，关于接骨木的化学成分报道主要为木脂素类、三萜类、酚酸类及环烯醚萜类[3-6]。
本课题组前期对接骨木的研究中发现，其60%乙醇提取物具有抑制去卵巢所引起的骨质疏松的活性[6]，本研究对其进行深入的化学成分研究，从中分离得到了6个木脂素类化合物和1个酚酸类化合物，通过光谱学方法鉴定了它们的结构，分别为threo-guaiacylglycerol-β-O-4′-conifery ether(1)，lirioresinol A(2)，1-hydroxypinoresinol(3)，5-甲氧基蛇菰宁(4)，蛇菰宁(5)，5-methoxy-trans-dihydrodehydrodiconiferyl alcohol(6)和对羟基苯甲醛(7)。并对所有分离得到的化合物进行了类成骨UMR106细胞增殖活性的测定，发现化合物1～7均能一定程度上促进UMR106细胞的增殖。
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1 材料
LCQ Advantage MAX质谱仪(美国Finnigan 公司)，Synapt G2质谱仪(美国Waters公司)，Avance-300/400超导核磁共振仪(瑞士Bruker公司)，Varian制备型高效液相色谱。制备高效液相色谱柱为Welch C18 (21.2 mm×250 mm， 5 μm)。薄层硅胶GF254和柱色谱硅胶(青岛海洋化工厂)，薄层色谱用硅胶GF254(烟台化学工业研究所)，D101大孔树脂(天津)，ODS(日本YMC公司)，Sephadex LH-20填料(瑞典Pharmacia公司)，Toyopearl HW-40填料(Toyo Soda MFG公司)，氘代试剂(美国CIL公司)。
试验用药材采自于辽宁本溪市草河口镇。由沈阳药科大学路金才教授鉴定为S. williamsii的茎枝，标本保存于暨南大学药学院中药及天然药物研究所。
UMR106 细胞(购自American Type Culture Collection，序号CRL-1661)，酶标仪(Spectra Max 340 PC，Molecular Devices，美国)，DMEM (Dulbecco′s modified Eagle medium)培养基、phenol red-free DMEM (pf-DMEM)、胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)、charcoal-stripped FBS (sFBS)、青霉素及链霉素(美国Invitrogen公司)，MTS(美国Promega公司)，PMS(日本TCI公司)，17β-estradiol(E2，美国Sigma公司)。
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2提取与分离
接骨木干燥茎枝82 kg经适当粉碎，用60%乙醇加热回流提取3次，每次2 h，合并提取液，冷冻干燥得接骨木提取物粉末(3 825 g)。以适量水混悬后，经D101大孔树脂柱色谱离，乙醇-水(0∶100， 30∶70， 50∶50， 95∶5)梯度洗脱得到JG-A～JG-D共4个部分。
JG-C取其中100.0 g进行硅胶柱色谱分离，氯仿-甲醇梯度洗脱得到11个亚流分(C1～C11)。亚流分C3经过ODS柱色谱，20%甲醇洗脱部分经HPLC制备(15%乙腈，tR7 =52.816 min)得到化合物7(18.1 mg)；40%甲醇洗脱部分经Sephadex LH-20柱色谱及HPLC制备(25%乙腈，tR2 =45.213 min)得到化合物2(4.1 mg)。亚流分C4经过ODS柱色谱分离，60%甲醇洗脱部分经Sephadex LH-20柱色谱，HW-40柱色谱及HPLC制备(27%乙腈，tR3 = 11.224 min，tR4 = 26.268 min；29%乙腈，tR5 =49.683 min)得到化合物3(5.9 mg)，4(2.1 mg)和5(14.0 mg)。亚流分C6经过ODS柱色谱分离，30%甲醇洗脱部分经HPLC制备(17%乙腈，tR1 = 40.756 min)，得到化合物1(13.1 mg)；60%甲醇洗脱部分经HW-40柱色谱及HPLC制备(23%乙腈，tR6 = 33.910 min)，得到化合物6(6.7 mg)。, 百拇医药(许蒙蒙 段营辉 肖辉辉 戴毅 王振中 黄文秀 姚新生 萧伟)