金振口服液的HPLC指纹图谱研究(1)
[摘要]该研究建立了金振口服液HPLC指纹图谱测定方法，为金振口服液的质量控制提供新方法。采用RP-HPLC，phenomenex Luna C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色谱柱，以0.1%磷酸水溶液和乙腈为流动相，梯度洗脱，检测波长为280 nm，建立了金振口服液的指纹图谱，确立了金振口服液中17个共有峰，10批成品指纹图谱相似度在0.90以上。该研究建立的HPLC指纹图谱有较好的精密度、重复性和稳定性，适用于金振口服液的质量控制。
[关键词]金振口服液；高效液相色谱法；指纹图谱；相似度
金振口服液来源于民间儿科验方“羚羊清肺散”，具有清热解毒、祛痰止咳的功效，用于小儿急性支气管炎符合痰热咳嗽者，表现为发热、咳嗽、咳吐黄痰、咳吐不爽、舌质红、苔黄腻等。本研究参照《中国药典》2010年版一部附录[1]的要求及文献[2-10]建立了成品的指纹图谱，形成了较全面的质量控制方法，以更为有效的控制金振口服液的内在质量。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 材料 Agilent 1100 液相色谱仪(MWD多波长紫外-可见检测器， G1313A 全自动进样器，Agilent LC色谱工作站)，黄芩苷对照品(批号0715-9909，中国食品药品检定研究院提供)，乙腈(色谱纯)，水 (超纯水 )；其余试剂均为分析纯。金振口服液来自江苏康缘药业股份有限公司。
1.2 色谱条件 phenomenex Luna C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相0.1%磷酸水溶液(A)-乙腈(B)，梯度洗脱，0～35 min，95%～65% A；35～60 min，65%～15% A；60～65 min，15% A。流速1 mL·min-1；检测波长280 nm；柱温30 ℃；理论板数按参照物(黄芩苷)峰计算，应不低于6 000。
1.3 对照品溶液的制备 取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含200 μg的溶液，即得。
, 百拇医药
1.4 供试品溶液的制备 取金振口服液，离心，即得。
1.5 测定法 精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5 μL，分别注入液相色谱仪，测定。
2 结果与讨论
2.1 精密度试验 取批号为090201的金振口服液，按1.4项下方法制备供试品溶液，按1.2项下方法连续进样6次进行测定。考察各共有峰的相对保留时间和相对峰面积>3%的共有峰面积值，结果各共有峰相对保留时间均RSD≤0.15%，相对峰面积>3%的共有峰相对峰面积值均RSD ≤1.5%，又以第1次进样所得指纹图谱作为参照计算后5次进样所得指纹图谱的相似度，结果相似度结果均不小于0.99，符合指纹图谱的技术要求，表明该方法精密度良好。
2.2 稳定性试验 取批号为090201的金振口服液，按1.4项下方法制备供试品溶液，按1.2项下方法于0，3，6，9，12 h分别测定一次指纹图谱，共测5次考察各共有峰的相对保留时间和相对峰面积>3%的共有峰面积值，结果各共有峰相对保留时间均RSD≤1.5%，相对峰面积>3%的共有峰相对峰面积值均RSD ≤2.0%，又以第1次进样所得指纹图谱作为参照计算后5次进样所得指纹图谱的相似度，结果相似度结果均不小于0.99，表明供试品溶液12 h内成分是稳定的。
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2.3 重复性试验 取批号为090201的金振口服液，按1.4项下方法制备供试品溶液，按1.2项下方法于0，3，6，9，12 h分别测定一次指纹图谱，共测5次考察各共有峰的相对保留时间和相对峰面积>3%的共有峰面积值，结果各共有峰相对保留时间均RSD≤2.0%，相对峰面积>3%的共有峰相对峰面积值均RSD ≤2.0%，又以第1次进样所得指纹图谱作为参照计算后5次进样所得指纹图谱的相似度，结果相似度结果均不小于0.99，表明该方法可较好重复。
根据以上方法学考察结果，表明该方法测定金振口服液指纹图谱精密度、重复性、稳定性均较好，能够准确测定该制剂的指纹图谱。
2.4 指纹图谱的建立 分别取10批不同批号的金振口服液，按供试品的制备方法制备，分别测定。将 10批金振口服液指纹图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统的操作规范软件(版本2004A)， 对色谱峰进行多点校正后，自动匹配，生成对照指纹图谱(图1)，共标定16个共有峰，其中黄芩苷为参照峰(S)，各批金振口服液样品与对照指纹图谱比较相似度在0.985～0.999(图2，表1)。
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(4.5 mm×250 mm，5 μm， 迪马公司)，Kromasil C18(4.5 mm×250 mm，5 μm，THERMO公司)，phenomenex luna C18(4.6 mm×250 mm，5 μm，菲罗门公司)，Alltima C18(4.6 mm×250 mm，5 μm，Alltech公司)4种色谱柱进行了考察，以phenomenex luna C18色谱柱对制剂中各成分分离效果最好，因此选择用该类型色谱柱作为金振口服液指纹图谱测定专用色谱柱。
为了能更全面的反映制剂中的成分，本研究检测了210，240，280，300，330 nm 5个波长下的指纹图谱，经比较分析，确定280 nm为制剂指纹图谱的检测波长，在该波长下的制剂指纹图谱中，除已知成分黄芩苷能够较好的检测出外，其他成分指纹峰也能被较好地体现，且各峰分离度好，所以最终选择280 nm作为金振口服液指纹图谱测定波长。
金振口服液辅料有较强的紫外吸收，在保留时间为39 min左右产生吸收峰，在指纹图谱计算过程中将该峰规避，另外对比各药材，此次建立指纹图谱只反映了4味药材的成分变化情况，针对金振口服液的全面质量控制，还需要进一步研究。, 百拇医药(胡军华 苏倩倩 李婷婷 李家春 萧伟)
[关键词]金振口服液；高效液相色谱法；指纹图谱；相似度
金振口服液来源于民间儿科验方“羚羊清肺散”，具有清热解毒、祛痰止咳的功效，用于小儿急性支气管炎符合痰热咳嗽者，表现为发热、咳嗽、咳吐黄痰、咳吐不爽、舌质红、苔黄腻等。本研究参照《中国药典》2010年版一部附录[1]的要求及文献[2-10]建立了成品的指纹图谱，形成了较全面的质量控制方法，以更为有效的控制金振口服液的内在质量。
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1 材料与方法
1.1 材料 Agilent 1100 液相色谱仪(MWD多波长紫外-可见检测器， G1313A 全自动进样器，Agilent LC色谱工作站)，黄芩苷对照品(批号0715-9909，中国食品药品检定研究院提供)，乙腈(色谱纯)，水 (超纯水 )；其余试剂均为分析纯。金振口服液来自江苏康缘药业股份有限公司。
1.2 色谱条件 phenomenex Luna C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相0.1%磷酸水溶液(A)-乙腈(B)，梯度洗脱，0～35 min，95%～65% A；35～60 min，65%～15% A；60～65 min，15% A。流速1 mL·min-1；检测波长280 nm；柱温30 ℃；理论板数按参照物(黄芩苷)峰计算，应不低于6 000。
1.3 对照品溶液的制备 取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含200 μg的溶液，即得。
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1.4 供试品溶液的制备 取金振口服液，离心，即得。
1.5 测定法 精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5 μL，分别注入液相色谱仪，测定。
2 结果与讨论
2.1 精密度试验 取批号为090201的金振口服液，按1.4项下方法制备供试品溶液，按1.2项下方法连续进样6次进行测定。考察各共有峰的相对保留时间和相对峰面积>3%的共有峰面积值，结果各共有峰相对保留时间均RSD≤0.15%，相对峰面积>3%的共有峰相对峰面积值均RSD ≤1.5%，又以第1次进样所得指纹图谱作为参照计算后5次进样所得指纹图谱的相似度，结果相似度结果均不小于0.99，符合指纹图谱的技术要求，表明该方法精密度良好。
2.2 稳定性试验 取批号为090201的金振口服液，按1.4项下方法制备供试品溶液，按1.2项下方法于0，3，6，9，12 h分别测定一次指纹图谱，共测5次考察各共有峰的相对保留时间和相对峰面积>3%的共有峰面积值，结果各共有峰相对保留时间均RSD≤1.5%，相对峰面积>3%的共有峰相对峰面积值均RSD ≤2.0%，又以第1次进样所得指纹图谱作为参照计算后5次进样所得指纹图谱的相似度，结果相似度结果均不小于0.99，表明供试品溶液12 h内成分是稳定的。
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2.3 重复性试验 取批号为090201的金振口服液，按1.4项下方法制备供试品溶液，按1.2项下方法于0，3，6，9，12 h分别测定一次指纹图谱，共测5次考察各共有峰的相对保留时间和相对峰面积>3%的共有峰面积值，结果各共有峰相对保留时间均RSD≤2.0%，相对峰面积>3%的共有峰相对峰面积值均RSD ≤2.0%，又以第1次进样所得指纹图谱作为参照计算后5次进样所得指纹图谱的相似度，结果相似度结果均不小于0.99，表明该方法可较好重复。
根据以上方法学考察结果，表明该方法测定金振口服液指纹图谱精密度、重复性、稳定性均较好，能够准确测定该制剂的指纹图谱。
2.4 指纹图谱的建立 分别取10批不同批号的金振口服液，按供试品的制备方法制备，分别测定。将 10批金振口服液指纹图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统的操作规范软件(版本2004A)， 对色谱峰进行多点校正后，自动匹配，生成对照指纹图谱(图1)，共标定16个共有峰，其中黄芩苷为参照峰(S)，各批金振口服液样品与对照指纹图谱比较相似度在0.985～0.999(图2，表1)。
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(4.5 mm×250 mm，5 μm， 迪马公司)，Kromasil C18(4.5 mm×250 mm，5 μm，THERMO公司)，phenomenex luna C18(4.6 mm×250 mm，5 μm，菲罗门公司)，Alltima C18(4.6 mm×250 mm，5 μm，Alltech公司)4种色谱柱进行了考察，以phenomenex luna C18色谱柱对制剂中各成分分离效果最好，因此选择用该类型色谱柱作为金振口服液指纹图谱测定专用色谱柱。
为了能更全面的反映制剂中的成分，本研究检测了210，240，280，300，330 nm 5个波长下的指纹图谱，经比较分析，确定280 nm为制剂指纹图谱的检测波长，在该波长下的制剂指纹图谱中，除已知成分黄芩苷能够较好的检测出外，其他成分指纹峰也能被较好地体现，且各峰分离度好，所以最终选择280 nm作为金振口服液指纹图谱测定波长。
金振口服液辅料有较强的紫外吸收，在保留时间为39 min左右产生吸收峰，在指纹图谱计算过程中将该峰规避，另外对比各药材，此次建立指纹图谱只反映了4味药材的成分变化情况，针对金振口服液的全面质量控制，还需要进一步研究。, 百拇医药(胡军华 苏倩倩 李婷婷 李家春 萧伟)