虫草素调控eIF2α/TGF—β/Smad信号通路改善肾间质纤维化的机制(2)
2.2 动物分组及给药 将15只小鼠随机分为3组,即对照组、模型组和虫草素组。自建立UUO模型当日开始,虫草素组小鼠经腹腔注射给予虫草素(5 mg·kg-1·d-1),对照组和模型组小鼠仅给予同体积的生理盐水,每日1次。在手术后第5天处死小鼠,并分离左侧肾脏,用于组织学染色、免疫组织化学染色(简称“免疫组化”)以及核酸、蛋白质分析。2.3 细胞培养及干预措施 体外培养实验采用大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E细胞)进行(购自日本ATCC细胞库)。使用DMEM/F-12培养液(Hyclone公司)+5% FBS(Sciencell公司)+1×105 U·L-1的青、链霉素(Hyclone公司);在37 ℃,5%CO2培养箱中进行培养。每天观察细胞数量及形态,待细胞生长汇合至80%时,用0.25%的胰蛋白酶(Hyclone公司)消化5 min,至贴壁细胞漂浮后,予5 mL含5%FBS的完全培养基终止消化 ......
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