杜文杰等：藏药羌活鱼的COⅠ分子鉴定3.2PCR扩增及序列分析提取的模板DNA以LCO1490，HCO2198为引物，经过PCR得到约740 bp的扩增带见图1，表明样品模板DNA质量符合PCR反应的要求。样品的GC%含量及其Genbank登录号见表3;序列分析结果见图2。

    M. Marker; CK. 阴性对照; 1.山溪鲵1;2.山溪鲵2;3.山溪鲵3;4.山溪鲵4;5.西藏山溪鲵1;6.西藏山溪鲵2;7.西藏山溪鲵3;A，A′.无斑肥源1;B，B′.无斑肥源2;C，C′.截趾虎1;D，D′.截趾虎2(图3同)。

    图1PCR扩增

    Fig.1PCR amplification results

    3.3高特异性PCR鉴别当退火温度升高到54 ℃，25个循环时，只有正品羌活鱼在约350 bp处有单一扩增带，无斑肥源和截趾虎无扩增带，见图3。特异性PCR反应参数确定为：94 ℃预变性5 min后，94 ℃变性30 s，54 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共运行25个循环，最后一个循环结束后72 ℃再延伸7 min。依据PCR扩增回收产物有无扩增带即可确定受试样品为正品羌活鱼还是无斑肥源和截趾虎。

    羌活鱼、无斑肥源和截趾虎以特异性引物SJYW1 ......