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编号:12620571
红花黄酮醇合酶基因的全长cDNA克隆及植物表达载体的构建(3)
http://www.100md.com 2015年2月15日 中国中药杂志 2015年第4期
     为查明红花FLS基因编码蛋白与其他物种FLS

    蛋白的同源性,利用clustalW1.83软件进行多重序列比对,并构建系统发生树(图4),结果发现红花FLS基因编码的蛋白序列与金光菊的FLS蛋白序列具有很高的同源性,在分类上与金光菊和香菜聚为一类,与其他植物的FLS蛋白同源性也都较高,说明红花FLS基因在同属物种间的进化上是很保守的。

    2.5植物表达载体的构建

    将植物表达载体pBASTA和带有目的基因序列的重组载体pMD18-T-FLS分别用Xba I和Spe I进行双酶切,将目的片段与酶切后的pBASTA载体用T4 DNA连接酶连接后,得到植物表达载体pBASTA-FLS。将构建好的植物表达载体转化大肠杆菌DH5α,对重组阳性质粒进行菌液PCR验证(图5)和双酶切验证(图6),都获得预期大小为1 201 bp的目的片段 ......
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