甘草总黄酮抑制硫代乙酰胺诱导肝纤维化大鼠肝组织中TGF—β1 及Caspase—3的表达(3)

http://www.100md.com 2015年4月15日 中国中药杂志2015年第8期

     2.4 免疫组织化学实验 切片脱蜡至水;复用0.01 mol·L^-1柠檬酸缓冲液(pH 6.0)微波(95～98 ℃)加热处理20 min，冷却至室温进行抗原修复;PBS(pH 7.4)洗5 min，3次后行0.3% H₂O₂ 37 ℃孵育10 min后，加羊血清封闭，37 ℃ 5 min;分别滴加兔抗多克隆 TGF-β1，Caspase-3抗体(稀释比例分别为1∶100，1∶100)，37 ℃ 孵育2 h;PBS 洗5 min，3次;滴加DAB复合物显色;10 min 后流水冲洗终止显色， 苏木素复染5 min;烤干后封片。其中正常对照组用PBS代替一抗，其他步骤与以上程序相同。每例动物各取1张免疫组化切片，在低倍镜(10×10)下观察 ......