2.5RNA 提取，cDNA合成和实时荧光定量PCR 贴壁纯化的巨噬细胞用含不同浓度生物碱(同2.3项)的细胞培养液处理18 h，弃掉培养基，用PBS洗3遍，用Trizol试剂提取总 RNA。用核酸定量仪测定RNA的纯度和浓度。用Primer preminer 5.0软件设计引物，并由上海英潍捷基贸易有限公司合成，引物序列见表1。用反转录试剂盒按以下条件进行反转录：50 ℃反应50 min，85 ℃反应5 min，冰水浴5 min，终止反应，将 cDNA 模板置于-20 ℃保存。以反转录的 cDNA 为模板进行实时定量PCR。反应程序：95 ℃预变性2 min，95 ℃变性15 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，30个循环，72 ℃ 5 min。mRNA相对表达水平的计算采用了2-ΔΔCt法和用βactin进行标准化。

    2.6黄连生物碱对巨噬细胞膜蛋白构象的影响 蛋白质分子中因含有苯丙氨酸(Phe)、酪氨酸(Tyr)、色氨酸(Trp)残基而产生内源性荧光[16]。分别固定Phe，Tyr和Trp 3种氨基酸残基在巨噬细胞膜蛋白中的发射波长为282 ......