创建酿酒酵母细胞工厂发酵生产羽扇豆醇(2)
22NK2LUP系列菌株的构建构建NK2LUP工程菌株所采用的方法与21相同，见图3，表3。首先，Group B中模板和引物的搭配方案，用PrimeSTAR HS高保真聚合酶扩增和割胶回收得到用于同源重组的各个片段。然后用SMUra培养基活化NK2SQ菌株并利用醋酸锂方法制备成感受态细胞，将各个片段转入感受态中[11]，用SMUraTrp固体培养基筛选转化子。转化子用引物SacIIPGK1/LUPAsc进行PCR验证和测序验证后，得到工程菌NK2LUP，见表1。
23摇瓶发酵方法及产物提取方法挑取平板上的单克隆于相应液体培养基中，30 ℃，250 r·min-1。将种子液接种于含15 mL YPD培养基的100 mL的三角瓶中，30 ℃，250 r·min-1振荡培养6 d后，进行产物的提取。产物提取的方法如下：取2 mL的发酵液于破碎管中，13×103 r·min-1离心3min，去培养基，无菌水清洗后，加入适量玻璃珠(直径为05 mm)和05 mL丙酮，震荡破碎5 min，超声破碎30 min，13×103 r·min-1离心3 min ......
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23摇瓶发酵方法及产物提取方法挑取平板上的单克隆于相应液体培养基中，30 ℃，250 r·min-1。将种子液接种于含15 mL YPD培养基的100 mL的三角瓶中，30 ℃，250 r·min-1振荡培养6 d后，进行产物的提取。产物提取的方法如下：取2 mL的发酵液于破碎管中，13×103 r·min-1离心3min，去培养基，无菌水清洗后，加入适量玻璃珠(直径为05 mm)和05 mL丙酮，震荡破碎5 min，超声破碎30 min，13×103 r·min-1离心3 min ......
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