灵芝DNA甲基转移酶(GlMET1)基因克隆及原核表达诱导分析(2)
16pET28a(+)GlMET1的原核表达及条件优化
将构建好的pET28a(+)GlMET1质粒转化到BL21(DE3)表达感受态中，进行转化表达宿主菌。取转化表达菌液按照1∶100加到含卡那霉素抗性的LB培养液中，37 ℃ 250 r·min-1振荡培养约25 h至A600 04～06，加IPTG于16 ℃低温诱导12 h，收集菌体，加入等体积的2×loading buffer 煮沸，上样，用10%的聚丙烯酰胺凝胶进行SDSPAGE分析。针对诱导温度、诱导时间、IPTG浓度，及IPTG添加时间( 即诱导起始菌液浓度A600) 等4个因素对原核表达产物的积累有一定影响，分析了这4个因素对灵芝DNMT1重组蛋白表达的影响。
17Realtime PCR
从转录组中数据中获取灵芝内参照GlGPD和GlMET1的核苷酸序列，利用Primer Premier 50设计实时荧光定量引物 ......
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将构建好的pET28a(+)GlMET1质粒转化到BL21(DE3)表达感受态中，进行转化表达宿主菌。取转化表达菌液按照1∶100加到含卡那霉素抗性的LB培养液中，37 ℃ 250 r·min-1振荡培养约25 h至A600 04～06，加IPTG于16 ℃低温诱导12 h，收集菌体，加入等体积的2×loading buffer 煮沸，上样，用10%的聚丙烯酰胺凝胶进行SDSPAGE分析。针对诱导温度、诱导时间、IPTG浓度，及IPTG添加时间( 即诱导起始菌液浓度A600) 等4个因素对原核表达产物的积累有一定影响，分析了这4个因素对灵芝DNMT1重组蛋白表达的影响。
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从转录组中数据中获取灵芝内参照GlGPD和GlMET1的核苷酸序列，利用Primer Premier 50设计实时荧光定量引物 ......
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