花叶型与艾叶型乌头叶片基因组DNA甲基化修饰的MSAP分析(3)

http://www.100md.com 2016年10月1日 《中国中药杂志》2016年第19期

     3.3 MSAP预扩增 MSAP试验中，较好的预扩增PCR产物能够有效减少选择性碱基的错配率，为选择性扩增提供更多的PCR反应模板，同时对选择性扩增起到选择纯化的作用。经过双酶切并连接了接头后的乌头叶片DNA，其MSAP预扩增PCR产物在1.0%的琼脂糖凝胶电泳图上呈均匀的弥散状分布，并且大部分集中在250～1 500 bp。预扩增电泳结果见图4。

    3.4 MSAP引物筛选 针对EcoRⅠ接头引物(E1E16)和HpaⅡ/MspⅠ接头引物(H/M1H/M16)的组合，进行乌头叶片基因组MSAP选择性扩增PCR的适宜引物筛选，以能够扩增出较多的条带、条带在琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳的泳道中分布较均匀、泳道背景无严重抹状拖尾的引物组合为适宜引物对。本实验从256对(16×16)引物组合中进行了选择性扩增引物筛选实验，经1.5%琼脂糖凝胶电泳检测，初选出50对较适宜的选择性扩增引物组合，见图5。再经6.0%聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染显色检测，从50对候选引物组合中，最终选定了25对较佳的引物组合作为本次实验中不同叶型乌头基因组MSAP差异化检测的选择性扩增PCR引物对 ......