蟾皮中亲水性成分的化学研究(1)
[摘要]综合利用硅胶、ODS及正相、半制备高效液相等多种色谱技术，对蟾皮大孔树脂15%乙醇洗脱部位进行化学成分分离，运用现代波谱学方法结合文献对分离得到的化合物进行结构鉴定。该研究从蟾皮中共分离鉴定了15个亲水性化合物，分别为：4，5-dimethyl-1，3，4，5-tetrahydropyrrolo[4，3，2-de]quinolin-6-ol(1)，5-羟色胺(2)，N-methyl serotonin(3)，蟾蜍素(4)，1，2，3，4-tetrahydro-6-hydroxy-β-carboline(5)，5-甲氧基色胺(6)，甜菜碱(7)，咖啡因(8)，蟾毒色胺(9)，shepherdine(10)，色氨酸(11)，5-羧基吲哚-3-乙酸(12)，5-羟基色醇(13)，2-methyl-6-hydroxy-1，2，3，4-tetrahydro-β-carboline(14)，蟾蜍噻咛(15)。其中化合物1为新化合物，化合物5为新天然产物并首次报道其碳谱，化合物4～8，10～14为首次从蟾皮中分离得到。
[关键词]蟾皮； 吲哚烷胺； 亲水性成分
[Abstract]Fifteen compounds were isolated from the toad skin by a combination of various chromatographic methods including macroporous resin， silica gel， ODS and semi-preparative HPLC. Their structures were identified as 4，5-dimethyl-1，3，4，5-tetrahydropyrrolo[4，3，2-de]quinolin-6-ol(1)， serotonin(2)，N-methyl serotonin(3)，O-methyl bufotenine(4)， 1，2，3，4-tetrahydro-6-hydroxy-β-carboline(5)，O-methylserotonin(6)， glycinebetaine(7)， caffeine(8)， bufotenine(9)， shepherdine(10)， tryptophan(11)， (5-hydroxy-1H-indol-3-yl)acetic acid(12)， 5-hydroxy tryptophol(13)， 2-methyl-6-hydroxy-1，2，3，4-tetrahydro-β-carboline(14)， bufothionine(15). Among them， compound 1 was a new compound，compound 5 was a new natural product. Compounds 4-8 and 10-14 were separated from toad skin for the first time.
[Key words]toad skin； indolealkylamines； hydrophilic constituents
doi：10.4268/cjcmm20162011
蟾皮为蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufo gargarizans Cantor或黑眶蟾蜍B. melanostictus Schneider的干燥皮。味辛，性凉，有小毒。为临床常用中药，应用历史悠久，有清热解毒，利水消胀之功效，被广泛用于华蟾素注射液、华蟾素口服液、鹤蟾片等多种中成药中。临床适用于痈疽疮毒、疳积腹胀、瘰疬肿瘤等症[1]。现代研究显示蟾皮具有广泛的药理活性，包括抗肿瘤、抗乙肝病毒、免疫调节等，临床常用于治疗各种肿瘤、癌症疼痛、乙型肝炎、腮腺炎、慢性气管炎、带状疱疹、骨髓炎、咽喉肿痛、痈肿疔毒和体表感染等[2-3]。化学研究表明蟾皮中主要含有氨基酸、核苷、多肽、吲哚类生物碱、蟾蜍甾烯、蟾蜍环酰胺、甾醇等成分[3-4]。为进一步明确蟾皮传统功效的药效物质基础，完善蟾皮及蟾皮制剂质量控制标准，本研究对蟾皮中亲水性物质进行了分离，共得到并鉴定了15个化合物，其中化合物1为新化合物，化合物5为新天然产物并首次报道其碳谱数据，化合物4～8，10～14为首次从蟾皮中分离得到。其中以5-羟基色胺、蟾毒色胺、蟾毒噻咛、N-甲基-5-羟色胺为代表的吲哚烷胺类化合物具有5-羟色胺样活性，与循环系统、呼吸系统、消化系统、中枢系统功能密切相关[5-7]。5-羟色胺是体温调节中枢发热介质[8]，吲哚烷胺类化合物的5-HT样活性可能是蟾皮清热解毒功效的物质基础。同时，蟾皮中的咖啡因类生物碱可增加人类及大鼠的尿液和尿钠排出量[9]，与蟾皮利水消肿传统功效相关。综上，蟾皮中亲水性物质中与蟾皮清热解毒、利水消胀等传统功效具潜在关联，有待进一步深入研究。
1 材料
双压线性离子阱串联高分辨质谱Orbitrap Velos Pro(Thermo Fisher 公司)；戴安Ultimate3000超高效液相色谱仪；Avance型600 MHz核磁共振仪(TMS内标，瑞士Bruker公司)；Waters 600型液相色谱仪(Waters公司)；Agilent 1100型高效液相色谱仪(安捷伦公司)；X-4 显微熔点仪(上海精密科学仪器有限公司)；A22502 APV-plus高精度旋光仪(Rudolph Research Analytical公司)；Agilent，SB-C18半制备色谱柱(9.4 mm×250 mm，5 μm)；TSK Amide-80半制备色谱柱(7.8 mm×300 mm，5 μm)；TSK Amide-80分析色谱柱(2 mm×150 mm，3 μm)；Waters HSST3 UPLC分析色谱柱(2.1 mm×100 mm，1.8 μm)；HPD-400型大孔树脂(河北沧州宝恩化工有限公司)；柱色谱用硅胶及GF254薄层色谱板(青岛海洋化工厂分厂)；ODS填料(50 μm，日本YMC公司)。色谱级甲醇、乙腈(美国Fisher公司)；其他试剂均为分析纯若无特别说明均购自北京化工厂。 (辛少鲲 司南 王宏洁 杨健 高波 魏晓露 赵海誉 边宝林)
[关键词]蟾皮； 吲哚烷胺； 亲水性成分
[Abstract]Fifteen compounds were isolated from the toad skin by a combination of various chromatographic methods including macroporous resin， silica gel， ODS and semi-preparative HPLC. Their structures were identified as 4，5-dimethyl-1，3，4，5-tetrahydropyrrolo[4，3，2-de]quinolin-6-ol(1)， serotonin(2)，N-methyl serotonin(3)，O-methyl bufotenine(4)， 1，2，3，4-tetrahydro-6-hydroxy-β-carboline(5)，O-methylserotonin(6)， glycinebetaine(7)， caffeine(8)， bufotenine(9)， shepherdine(10)， tryptophan(11)， (5-hydroxy-1H-indol-3-yl)acetic acid(12)， 5-hydroxy tryptophol(13)， 2-methyl-6-hydroxy-1，2，3，4-tetrahydro-β-carboline(14)， bufothionine(15). Among them， compound 1 was a new compound，compound 5 was a new natural product. Compounds 4-8 and 10-14 were separated from toad skin for the first time.
[Key words]toad skin； indolealkylamines； hydrophilic constituents
doi：10.4268/cjcmm20162011
蟾皮为蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufo gargarizans Cantor或黑眶蟾蜍B. melanostictus Schneider的干燥皮。味辛，性凉，有小毒。为临床常用中药，应用历史悠久，有清热解毒，利水消胀之功效，被广泛用于华蟾素注射液、华蟾素口服液、鹤蟾片等多种中成药中。临床适用于痈疽疮毒、疳积腹胀、瘰疬肿瘤等症[1]。现代研究显示蟾皮具有广泛的药理活性，包括抗肿瘤、抗乙肝病毒、免疫调节等，临床常用于治疗各种肿瘤、癌症疼痛、乙型肝炎、腮腺炎、慢性气管炎、带状疱疹、骨髓炎、咽喉肿痛、痈肿疔毒和体表感染等[2-3]。化学研究表明蟾皮中主要含有氨基酸、核苷、多肽、吲哚类生物碱、蟾蜍甾烯、蟾蜍环酰胺、甾醇等成分[3-4]。为进一步明确蟾皮传统功效的药效物质基础，完善蟾皮及蟾皮制剂质量控制标准，本研究对蟾皮中亲水性物质进行了分离，共得到并鉴定了15个化合物，其中化合物1为新化合物，化合物5为新天然产物并首次报道其碳谱数据，化合物4～8，10～14为首次从蟾皮中分离得到。其中以5-羟基色胺、蟾毒色胺、蟾毒噻咛、N-甲基-5-羟色胺为代表的吲哚烷胺类化合物具有5-羟色胺样活性，与循环系统、呼吸系统、消化系统、中枢系统功能密切相关[5-7]。5-羟色胺是体温调节中枢发热介质[8]，吲哚烷胺类化合物的5-HT样活性可能是蟾皮清热解毒功效的物质基础。同时，蟾皮中的咖啡因类生物碱可增加人类及大鼠的尿液和尿钠排出量[9]，与蟾皮利水消肿传统功效相关。综上，蟾皮中亲水性物质中与蟾皮清热解毒、利水消胀等传统功效具潜在关联，有待进一步深入研究。
1 材料
双压线性离子阱串联高分辨质谱Orbitrap Velos Pro(Thermo Fisher 公司)；戴安Ultimate3000超高效液相色谱仪；Avance型600 MHz核磁共振仪(TMS内标，瑞士Bruker公司)；Waters 600型液相色谱仪(Waters公司)；Agilent 1100型高效液相色谱仪(安捷伦公司)；X-4 显微熔点仪(上海精密科学仪器有限公司)；A22502 APV-plus高精度旋光仪(Rudolph Research Analytical公司)；Agilent，SB-C18半制备色谱柱(9.4 mm×250 mm，5 μm)；TSK Amide-80半制备色谱柱(7.8 mm×300 mm，5 μm)；TSK Amide-80分析色谱柱(2 mm×150 mm，3 μm)；Waters HSST3 UPLC分析色谱柱(2.1 mm×100 mm，1.8 μm)；HPD-400型大孔树脂(河北沧州宝恩化工有限公司)；柱色谱用硅胶及GF254薄层色谱板(青岛海洋化工厂分厂)；ODS填料(50 μm，日本YMC公司)。色谱级甲醇、乙腈(美国Fisher公司)；其他试剂均为分析纯若无特别说明均购自北京化工厂。 (辛少鲲 司南 王宏洁 杨健 高波 魏晓露 赵海誉 边宝林)