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编号:12987043
拉曼光谱研究两面针活性成分诱导肝癌细胞的凋亡(3)
http://www.100md.com 2016年11月1日 《中国中药杂志》2016年第21期
     从各组细胞中取一部分用于拉曼光谱的检测。激光光镊拉曼光谱系统(LTRS),激光光镊拉曼光谱系统实验装置及系统描述详见1.5项。一般而言,拉曼光谱系统激光激发光斑直径在2 μm左右,面积约3.14 μm2,肝癌细胞的直径一般在15~20 μm,面积大于200 μm2,入射激光仅照射细胞的局部区域不一定能获取整个细胞的光谱信息,本实验采用扫描方式收集细胞光谱,即设定一个区域和时间让激光连续在设定好的区域进行运动,以累积的方式记录光谱信号,由此获取的细胞光谱信息较全面。为了获得单个细胞的整体光谱,实验采用激光束动态扫描模式,激光束在一个周期内以分别向X轴横向和Y轴纵向运动,实验中扫描频率被设定为1 Hz。以20 mW激发功率和30 s曝光时间。拉曼系统实验条件是已经通过前期研究[12]设定,拉曼光谱的响应强度足以反映细胞的拉曼图谱。

    拉曼检测流程:加样,随机选取视野,视野中每个细胞均检测其拉曼光谱,然后用Hochest33342/PI染色法区分正常细胞、凋亡细胞和死亡细胞,最后选取凋亡细胞的拉曼光谱进行数据分析。重复以上操作直到获得30个凋亡细胞的拉曼光谱数据 ......
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