稀土元素镧对丹参活性物质积累及其合成途径中酶基因表达的影响(2)
1材料
采用发根农杆菌菌株Agrobacterium rhizogenes 15834处理丹参叶片获得丹参毛状根，将经PCR鉴定的阳性株系置于67 V液体培养基[9]中培养。精确称取05 g毛状根接种于50 mL培养基，25 ℃，110～120 r·min-1搖床上避光培养。
2方法
21实验处理
毛状根继代培养18 d后，在无菌条件下添加LaCl3使其终浓度达到001 mmol·L-1(浓度由预实验得到)，对照加等量灭菌水，每个处理6个重复，分别于处理后1，3，5，9，15 d取样，取样时将毛状根取出后迅速吸干水分，每一取样点取得的样品分为2份，一份样品用液氮迅速冷冻，置-70 ℃超低温冰箱保存备用，用于基因表达分析；另一份迅速超低温冷冻干燥，用于丹参活性物质含量测定。
22毛状根中活性物质含量测定
将干燥后的丹参毛状根研磨过筛，70%乙醇提取，HPLC同时测定迷迭香酸、丹酚酸B、二氢丹参酮、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA含量[1013] ......
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采用发根农杆菌菌株Agrobacterium rhizogenes 15834处理丹参叶片获得丹参毛状根，将经PCR鉴定的阳性株系置于67 V液体培养基[9]中培养。精确称取05 g毛状根接种于50 mL培养基，25 ℃，110～120 r·min-1搖床上避光培养。
2方法
21实验处理
毛状根继代培养18 d后，在无菌条件下添加LaCl3使其终浓度达到001 mmol·L-1(浓度由预实验得到)，对照加等量灭菌水，每个处理6个重复，分别于处理后1，3，5，9，15 d取样，取样时将毛状根取出后迅速吸干水分，每一取样点取得的样品分为2份，一份样品用液氮迅速冷冻，置-70 ℃超低温冰箱保存备用，用于基因表达分析；另一份迅速超低温冷冻干燥，用于丹参活性物质含量测定。
22毛状根中活性物质含量测定
将干燥后的丹参毛状根研磨过筛，70%乙醇提取，HPLC同时测定迷迭香酸、丹酚酸B、二氢丹参酮、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA含量[1013] ......
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