24SmSnRK24蛋白原核表达根据SmSnRK24基因的ORF序列，设计上游引物F：5′CGCGGATCCATGGAGAAATAC3′(下划线处为保护碱基和BamHⅠ酶切位点)，下游引物R：5′GACGTCGACCTAAGTGATACG3′(下劃线处为保护碱基和SalⅠ酶切位点)，以上述重组质粒SmSnRK24pEASY为模板进行扩增，将PCR产物连接到表达载体pMALc2X的BamHⅠ和SalⅠ酶切位点处，获得重组质粒SmSnRK24pMAL，将鉴定和测序正确的重组质粒和空的表达载体分别转化到大肠杆菌Rosetta中，挑取重组菌的单菌落接种至含有氨苄霉素的LB液体培养基中，37 ℃培养过夜，然后按照1∶100稀释到含有抗生素的LB液体培养基中，当A600达到06～08的时候分别加入01，03，05，07，09 mmol·L-1 IPTG诱导表达，22 ℃诱导16 h。取诱导后菌液1 mL，4 000 r·min-1离心10 min，收集菌体，弃上清 ......