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编号:13060369
半枝莲总黄酮通过PI3K/AKT/mTOR通路诱导肿瘤细胞自噬的体内实验研究(3)
http://www.100md.com 2017年4月1日 《中国中药杂志》2017年第7期
     2.5 TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡情况 取一部分肿瘤组织,进行冷冻切片,TUNEL分析,观察肿瘤细胞凋亡情况,方法如下:组织经石蜡切片脱蜡至水、用蛋白酶K修复、破膜处理后,加试剂:取试剂1 TdT 5 μL和试剂2 dUTP 45 μL混合,覆盖组织,37 ℃水浴60 min,然后将切片放入用甲醇配制的3% H2O2溶液中,室温避光孵育20 min,以阻断内源性过氧化物酶,再加试剂3 converterPOD覆盖组织,37 ℃水浴锅孵育30 min;DAB显色:用新鲜配制的DAB显色液覆盖组织,于显微镜下控制显色时间,阳性凋亡细胞的细胞核呈棕黄色;复染细胞核:用Harris苏木素复染细胞核3 min左右,最后用乙醇、二甲苯等试剂将切片脱水,用中性树胶封片。切片经JEdA801D形态学分析系统观察肿瘤组织细胞凋亡情况,每张切片随机选取5个视野于400高倍镜下观察凋亡细胞数、并计算细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)[3]=(对照组瘤重-药物组瘤重)/对照组瘤重×100%。

    2.6 Western blot法检测LC3Ⅰ ......
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