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编号:13051158
在线固相萃取—HPLC测定4种虫草类药材中虫草素和2′—脱氧腺苷(1)
http://www.100md.com 2017年5月15日 《中国中药杂志》2017年第10期
     [摘要] 该文建立一种同时测定4种虫草类药材(冬虫夏草、蛹虫草、虫草菌丝体和蝉花)中虫草素(3′-脱氧腺苷)和2′-脱氧腺苷含量的在线固相萃取-高效液相色谱分析方法。供试品经ZORBAX SB-AQ(4.6 mm×12.5 mm,5 μm)色谱柱富集,水-甲醇(91∶9)洗脱;ZORBAX SB-AQ(4.6 mm×150 mm,5 μm)色谱柱分离,流动相为0.1%甲酸水溶液-甲醇(91∶9),检测波长260 nm,柱温40 ℃,流速1.0 mL·min-1,分别对4种虫草类药材中虫草素和2′-脱氧腺苷含量进行检测。结果表明冬虫夏草、虫草菌丝体和蝉花样品中仅检测到2′-脱氧腺苷,蛹虫草样品中仅检测到虫草素,早期报道的在冬虫夏草中检测到的虫草素色谱峰可能是其同分异构体2′-脱氧腺苷色谱峰或以2′-脱氧腺苷为主的与虫草素的共洗脱色谱峰。该方法重复性好,准确度高,分析时间短,可用于虫草类药材中虫草素和2′-脱氧腺苷的分析。

    [关键词] 固相萃取; 高效液相; 虫草素(3′-脱氧腺苷); 2′-脱氧腺苷

    [Abstract] An online SPE-HPLC method for simultaneous determination of cordycepin (3′-deoxyadenosine) and 2′-deoxyadenosine in Cordyceps genus (C. sinensis,C. militaris,Hirsutella sinensis and C. sobolifera) was developed. The samples were enriched on a ZORBAX SB-AQ (4.6 mm×12.5 mm,5 μm) column with isocratic elution by 9% methanol solution. The separation of analytes was performed on a ZORBAX SB-AQ (4.6 mm×150 mm,5 μm) column with gradient elution by 0.1% formic acid solution and methanol (91∶9). The flow rate was 1.0 mL·min-1. Column temperature was 40 ℃ and detection wavelength was 260 nm. This method has been applied for analysis of different Cordyceps genus. The 2′-deoxyadenosine was detected in C. sinensis,Hirsutella sinensis and C. sobolifera. The cordycepin was detected in C. militaris. In summary,the cordycepin chromatographic peak from C. sinensis in some past reports may be the 2′-deoxyadenosine chromatographic peak or the mixture peak of 2′-deoxyadenosine and cordycepin in which 2′-deoxyadenosine content was higher than cordycepin. The developed method is suitable for analysis of cordycepin and 2′-deoxyadenosine in Cordyceps genus.

    [Key words] SPE; HPLC; cordycepin (3′-deoxyadenosine); 2′-deoxyadenosine

    冬蟲夏草是麦角菌科真菌冬虫夏草菌Cordyceps sinensis(BerK.)Sacc.寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座和幼虫尸体的复合体,具有补肺益肾,止血化痰的功效[1]。现代药理学研究表明,冬虫夏草具有抗肿瘤、免疫调节、保护肝脏、保护肾脏、保护心血管、延缓衰老等功效[2-5]。蛹虫草为蛹草真菌C. militaris以虫蛹为寄主或在人工培养基上形成的子实体,虫草菌丝体为中华被毛孢真菌Hirsutella sinensis通过液体发酵技术生产的菌丝体,蝉花为蝉花真菌C. sobolifera寄生于蝉类若虫形成的菌虫复合体[6]。

    虫草素(3′-脱氧腺苷)具有抗肿瘤、抗菌、抗病毒、免疫调节、清除自由基等多种药理作用[7-8],有观点认为其是冬虫夏草的主要活性成分,也有研究认为冬虫夏草中虫草素不存在或含量极微,而含有的是2′-脱氧腺苷[9-10]。虫草素与其同分异构体2′-脱氧腺苷结构相近,液相分离困难,容易造成错误指认。前期实验结果表明虫草素在蛹虫草中含量相对较高,但在冬虫夏草中含量很低,定量困难,精确指认不易[11]。因此有必要开发一种能够有效分离虫草素和2′-脱氧腺苷,并准确定量的分析方法,对虫草类药材中存在的虫草素或2′-脱氧腺苷进行定性和定量分析。虫草素和2′-脱氧腺苷在虫草类药材的含量通常较低,本研究通过固相萃取法对虫草类药材中的虫草素和2′-脱氧腺苷进行富集,进而实现定量分析。

    固相萃取(solid phase extraction,SPE)是色谱分析中极其重要的一种样品前处理方法,主要目的是把痕量被测组分进行浓缩、富集、净化和介质转移(把被测组分从样品基体中转移到溶剂或气体中)[12],具有节省时间,溶剂用量少和不易乳化等优点[13]。自20世纪70年代后期商品化产品问世以来,SPE技术发展迅速,目前已被广泛应用于中药材中的微量物质分析[14-15]。在线SPE以柱切换系统为核心,通过程序控制多通道切换实现样品前处理与分离分析的偶联,能够自动化实现从生物样品前处理到数据分析的全部过程[16-17]。 (田野 王传喜 钱正明 李周 周妙霞 孙万阳 姚新生 李文佳 高昊)
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