牡蛎共生菌Chaetomium globosum ML4发酵液的化学成分及其体外抗肿瘤活性研究(3)
24流式细胞术检测细胞凋亡率采用Annexin V/PI双染技术检测细胞凋亡率。取对数生长期SMMC7721细胞，调整细胞密度为80×105个/mL，每孔05 mL接种于6孔板中，放入37 ℃，5% CO2培养箱中培养12 h。加药物20 μL于孔内，处理48 h；胰酶消化，收集细胞至15 mL离心管中，1 000 r·min-1离心5 min，并用PBS洗涤2遍；吸弃上清，每管加入500 μL 1×binding buffer重悬细胞；每管中加入5 μL AnnexinV和10 μL PI混匀，避光室温孵育15 min；300目尼龙网过滤，混悬均匀，用流式细胞仪进行检测。25Western blot法检测蛋白表达取加药处理后的细胞，弃去培养液，以预冷的PBS洗涤2次，加入相应体积的1×SDS蛋白裂解液，冰上放置30 min。以刮棒刮下细胞，沸水浴10 min，然后4 ℃12 000 r·min-1离心10 min。取上清，用改良Lowry法进行蛋白定量。调整样品蛋白质浓度使其相等，保证每个样品孔蛋白上样量一致 ......
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