黄芪和当归配伍对小鼠造血干细胞衰老模型细胞增殖的影响(4)
各组细胞同上处理后以SAβ半乳糖苷酶染色，倒置显微镜下计数400个细胞，计算衰老细胞阳性率=(阳性细胞数/细胞总数)×100%。运用流式细胞分选术测定细胞周期。离心收集各组细胞1×106个，PBS洗涤1次，70%冰乙醇固定过夜，100 μL牛胰核糖核酸酶(1 g·L-1)37 ℃孵育30 min。 孵育后用碘化丙啶(propidium iodide，PI)1 mL(用001 mol·L-1 PBS 配制终浓度50 mg·L-1的PI工作液)4 ℃避光30 min染色，测定样本细胞数不少于2×104个。计数G0期、G1期、S期、M期细胞百分比。
25RTPCR法测定Cyclin D1，P53，P21 mRNA的表达收集各组细胞，以Trizol试剂提取RNA，以紫外分光光度法测定A260和A280比值在18～22，说明RNA纯度高，无蛋白污染。取2 μg RNA采用First Strand cDNA Synthesis Kit试剂盒进行cDNA合成。然后进行PCR反应，循环次数40次。取10 μL PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳 ......
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