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编号:13101231
肉苁蓉低分子糖对巨噬细胞激活作用的研究(2)
http://www.100md.com 2017年11月1日 《中国中药杂志》 2017年第21期
     2方法

    21中性红法测定巨噬细胞吞噬活性取对数生长期的小鼠腹腔巨噬细胞,胰酶消化后,进行细胞计数,将细胞数调整为5×104个/mL,接种于96孔细胞培养板,100 μL/孔,于37 ℃,5%CO2条件下进行培养,待细胞贴壁后,弃去培养上清液,分别加入DMEM培养基(10%FBS+1%P/S),LPS(1 mg·L-1)以及肉苁蓉总苷、肉苁蓉总多糖、肉苁蓉低分子糖(分别为391~625 g·L-1,给药前用滤膜过滤)进行培养。培养48 h后,每孔加入0075%中性红生理盐水溶液100 μL,继续培养4 h,吸弃上清液,用PBS洗3遍,每孔加入细胞裂解液(冰醋酸乙醇1∶1)100 μL,4 ℃下放置2 h,待细胞裂解后测定吸光度(A540 nm)。

    22细胞上清液中NO释放量检测将RAW2647细胞接种于48孔板(1×105个/mL,500 μL/孔),过夜孵育后吸弃细胞培养基,分别加入DMEM培养基(10%FBS+1%P/S),LPS(1 mg·L-1)以及肉苁蓉总苷、总多糖、低分子糖(分别为391~625 g·L-1)各500 μL ......
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