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编号:13207772
基于自噬途径探讨半枝莲总黄酮抑制肿瘤细胞NLRP3炎症小体表达的机制研究(3)
http://www.100md.com 2017年12月15日 中国中药杂志 2017年第24期
     2.5 肿瘤细胞内自噬水平的检测 采用Western blot法检测肿瘤组织内LC3-Ⅱ及LC3-Ⅰ的蛋白表达水平,具体方法如下:剪取100 mg的肿瘤组织,加入1 mL的RIPA细胞裂解液,离心、收集上清液、提取总蛋白,经SDS-PAGE凝胶电泳,转膜,封闭,一抗孵育(LC3一抗按照1∶2 000稀释),二抗孵育(二抗使用HRP标记,按照1∶1万比例稀释),最后根据相关说明书,使用ECL发光试剂盒、暗室中显色,对LC3-Ⅱ及LC3-Ⅰ蛋白进行检测,最后采用北京科创锐新生物凝胶成像系统对实验结果进行分析。

    2.6 肿瘤组织内NLRP3炎症小体激活情况的检测 采用Western blot法检测肿瘤组织内炎症小体NLRP3,caspase-1,IL-1β,IL-18的蛋白表达水平,NLRP3及caspase-1,IL-1β,IL-18一抗分别按照按照1∶500~1∶1 000进行稀释,其余检测方法同2.5项。

    2.7 血清炎症因子IL-1β,IL-18含量的检测 末次药后30 min,包括正常对照组在内的所有小鼠眼眶采血0.5~1.0 mL,静置1 h,3 000 r·min-1离心15 min,分离血清 ......
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