摘要：目的： 构建用于RNAi的shRNA(small hairpin RNA)表达载体及检测其对低氧诱导因子1(Hypoxiainducible Factor1， HIF1)基因的沉默效果。方法： 从人血基因组中PCR扩增出H1基因启动子， 克隆入酶切处理后的pEGFPC1载体片段中， 此载体命名为pWH1。以人HIF1 cDNA基因为靶标设计引物， 退火后克隆入pWH1。新的载体转染SGC7901细胞， 然后用RTPCR和Western blot检测HIF1基因的表达改变。结果： 构建的pWH1载体能很好地表达针对HIF1基因的shRNA， RTPCR和Western blot的结果显示HIF1基因的mRNA和蛋白表达水平均明显下降。结论： 成功构建了shRNA表达载体pWH1， 这对于基因的功能研究具有重要的意义。

    关键字：shRNA表达载体RNA干涉HIF1基因

    RNA干涉(RNA interference， RNAi)是将双链RNA(dsRNA)导入细胞引起特异基因mRNA降解的一种细胞反应过程。它是转录后基因沉寂(PTGS)的一种。1998年， Fire等[1]在利用反义核酸技术来抑制线虫基因表达时意外地发现， 由正义和反义RNA退火形成的dsRNA引起的基因表达抑制要比单独应用正义或反义RNA强10倍以上。dsRNA引起的基因表达抑制不是正义或反义RNA引起的基因表达抑制在数学上的叠加 ......