ERK—1/2对N/OFQ调节大鼠皮层神经元延迟整流钾电流激活动力学的影响
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[摘要] 研究ERK-1/2对N/OFQ调节大鼠皮层神经元延迟整流钾电流(IK)激活动力学的影响，初步探讨N/OFQ调节大鼠皮层神经元延迟整流钾电流的ERK1/2途径。研究采用全细胞膜片钳技术，观察了ERK-1/2特异性抑制剂U0126对N/OFQ调节大鼠皮层神经元延迟整流钾电流(IK)激活动力学的影响。结果显示，在ERK-1/2抑制剂U0126存在情况下，IK激活曲线的V1/2由给药前的(-42 ± 3.7)mV向超极化方向移动为(-39.9 ± 5.9)mV(n = 8， P < 0.01)。IK激活曲线的κ由给药前的(21.6 ± 8.1)mV变为给药后的(22.9 ± 3.8)mV(n = 8， P < 0.05)；研究结果表明，U0126可以显著性抑制N/OFQ对IK激活曲线的影响。
1 材料与方法
1.1 实验动物 Wistar大鼠，10～14d，雌雄不限，由哈尔滨医科大学附属二院动物研究中心提供。
1.3 大鼠皮层体感区神经元的急性分离大鼠断头取脑，分离顶叶体感区皮质，置于0～4℃人工脑脊液中，切成厚约400～500μm的冠状脑片，在通混合气(95%O2+5%CO2)的人工脑脊液(32℃)中孵育30min，再将脑片置入含0.5% protease的人工脑脊液中消化30min，使脑片微震荡。取2片脑片用人工脑脊液冲洗2～3次。用尖端抛光的Pasteur吸管(口径分别为500、300、150 mm)，依次吹打，使组织块分散，将此液静置2～4min后，吸取上清液，滴于有氧细胞外液的培养皿中，静置20min后细胞贴壁，即可开始膜片钳记录，分离过程在室温(20～25℃)下进行。
1.4 全细胞记录方法 PC-ⅡC型膜片钳放大器、IBBClamp数据采集分析系统由华中理工大学研制。记录电极用PP-83型微电极拉制仪(Narishige， Japan)两步拉制，尖端直径1～3μm，入液电阻3～5MΩ。选取细胞膜表面光洁、光晕明显、符合典型的神经元形态的神经元进行实验。当电极贴近细胞后，负压吸引，形成高阻封接(1GΩ～3GΩ)后，给予脉冲式负压形成全细胞记录，调节电容和串联电阻补偿，采用电压钳模式，保持电压置于-80mV，低通滤波1kHz，给予不同的指令电压观察IK变化。
1.5 x给药方法及数据分析药物加入平皿中以终浓度计算，实验结果经膜片钳放大器数据采集分析软件(IBBClamp)输入计算机储存。实验数据采用Clampfit8.2和Origin7.5软件进行分析，结果用均数±标准差( ±s )表示，t检验进行差异显著性分析。
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